兔前列腺成纖維細胞的相關(guān)產(chǎn)品：人間變性大細胞淋巴瘤細胞Karpas-299(STR鑒定正確)Bacillus thermocloacae熱陰溝芽孢桿菌小鼠前胃癌細胞MFC（種屬鑒定）Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳桿菌血管內(nèi)皮細胞ECV-304(STR鑒定正確)Bacillus subtilis var. aterrimus枯草芽孢桿菌甚黑變種大鼠滑膜成纖維細胞Bacillu

一,、細胞基本屬性：

 

包被條件： 

培養(yǎng)基：原代成纖維細胞培養(yǎng)體系

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

原代細胞實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈長梭形細胞，不規(guī)則細胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠胚胎成纖維細胞,；3T3-L1

小鼠肺細胞；MML1
黃胸鼠肺成纖維細胞,；YCR
灰松鼠皮膚細胞,；GSQS1
小鼠結(jié)締組織L細胞株929克隆,；L-929[L929]
小鼠骨髓瘤細胞,；Sp2/0-Ag14
中國倉鼠肺細胞；CHL
中華菊頭蝠皮膚細胞,；CHBS2
小鼠黑色素瘤細胞,；B16
中國倉鼠肺細胞,；V79
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞,；PC-12[PC12]
小鼠腹水瘤細胞；S180-V
小耳豬腎細胞,；SEPfk
牛腎細胞,；MDBK
非洲綠猴腎細胞；VERO
D/E Ｎeutralizing Broth
D/E中和瓊脂
D/E Ｎeutralizing Agar
M-肉湯
M-Broth
煌綠黃胺嘧啶瓊脂
Brilliant Green Agar w/Sulfadiazine
醋酸鉛瓊脂
Lead Acetate Medium
MUCAP試劑
兔前列腺成纖維細胞四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB)
Tetrathionate Broth Base
沙門氏菌顯色培養(yǎng)基(第二代)
沙門氏菌A-F群診斷血清
MUCAP試劑