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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2012 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 氣管 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔氣管平滑肌細胞 | 商品貨號 | A01X2012 |
組織來源 | 氣管 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)良好 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
細胞簡介 |
兔氣管平滑肌細胞分離自氣管組織；氣管(Trachea),，呼吸器官的一部分,；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣,，與環(huán)狀軟骨相連,；向下至第四、五胸椎體(相當(dāng)胸骨角平面)交界處,，分左,、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈,。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構(gòu)成,，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán),，缺口向后,，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接,，保持了持續(xù)張開狀態(tài),。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮,，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒,，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體,。氣管平滑肌是氣管的重要結(jié)構(gòu)組成之一,，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用；能夠保持氣道張力,，維持氣道管狀形態(tài),，從而有利于氣體流通，保持肺部通氣,。氣管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏,；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。氣管平滑肌細胞的異常是呼吸道疾病的重要病理特征之一,，其增生,、肥大是氣道重塑的關(guān)鍵。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠雜交瘤細胞；SCGN-F9
小鼠雜交瘤細胞,；TE11A1
小鼠雜交瘤細胞,；9D47A1
小鼠雜交瘤細胞；hnRNPB1A10
小鼠雜交瘤細胞,；DV2-M14
發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞,；G1
小鼠雜交瘤細胞；3F16A4
小鼠胚胎干細胞,；LT04
小鼠雜交瘤細胞,；DV2-M6
小鼠雜交瘤細胞；CHGF-001
小鼠雜交瘤細胞,；CHGF-002
高背鯽魚尾鰭細胞,；GBJd
大鼠乳腺癌細胞；CHGF-003
人胚肺成纖維細胞,；MRC-5
人胚肺二倍體細胞,；HEL-1
SIM培養(yǎng)基
Hydrogen Sulfide Indole Motility Medium
乳糖肉湯
Lactose Broth
煌綠瓊脂
Brilliant Green Agar
去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽瓊脂
Desoxycholate Citrate Agar
吲哚培養(yǎng)基（蛋白胨水）
Indole Medium
兔氣管平滑肌細胞EF-18瓊脂
EF-18 Agar
RVS肉湯
RVS Broth
MKTTn肉湯（ISO）
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗,。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
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