兔主動脈瓣膜間質(zhì)細胞的相關(guān)產(chǎn)品：人乳腺癌細胞MDA-MB-231(STR鑒定正確)Arthrobacter sp.節(jié)桿菌人卵巢癌細胞HEY A8(STR鑒定正確)Aeromonas sp.氣單胞菌人結(jié)直腸癌細胞胞P53R(STR鑒定正確)Plesiomonas sp.鄰單胞菌人卵巢畸胎瘤細胞PA-1(STR鑒定正確)Pseudomonas solanacearum茄科假單胞菌

一,、細胞基本屬性：

包被條件： 

培養(yǎng)基：原代間質(zhì)細胞培養(yǎng)體系

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

公司正在出售的產(chǎn)品：
人慢性髓系白血病細胞（白介素15基因修飾）,；K562/IL15

人急性單核細胞白血病細胞（白介素15基因修飾）,；THP-1/IL15
人多發(fā)性骨髓瘤細胞（白介素15基因修飾）；RPMI-8226/IL15
綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸腺癌細胞,；COLO320DM-EGFP
青色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細胞,；HCT116-CFP
紅色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細胞；HCT116-RFP
紅色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸腺癌細胞,；COLO320DM-RFP
人T淋巴瘤細胞,；HUT102
人非小細胞肺癌細胞；NCI-H358
人非小細胞肺癌細胞,；NCI-H1299
人乳腺癌細胞,；HCC1937
人膠質(zhì)瘤細胞；GOS-3
人胰腺癌細胞系,；SW1990
小鼠皮膚黑色素瘤細胞,；B16-F10
人肝癌細胞,；Hep3B2.1-7
不wan全瓊脂培養(yǎng)基
Incomplete Agar Medium
ISP培養(yǎng)基2
ISP Medium 2
沉降菌測試培養(yǎng)基
沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)
Sabourauds Agar
大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）
Tryptose Soya Agar
胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）
兔主動脈瓣膜間質(zhì)細胞Tryptose Soya Broth
 2010版中國藥典增補培養(yǎng)基
胰酪胨大豆肉湯（TSB）

Tryptose Soya Broth
胰酪胨大豆瓊脂（TSA）

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈長梭形,，不規(guī)則細胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。