化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2014 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 正常支氣管組織 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 長梭狀細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 兔支氣管平滑肌細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X2014 |
組織來源 | 正常支氣管組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 長梭狀細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞簡介 |
平滑肌即無紋肌的通稱,，平滑肌是由長紡錘形的單核細(xì)胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨(dú)立的器官,，而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素（肌層）,。平滑肌細(xì)胞互相連接，形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官,；在功能上可以通過縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運(yùn)動和變形,，也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮，使器官對抗所加負(fù)荷而保持原有的形狀,。 支氣管平滑肌細(xì)胞的收縮,、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關(guān)．如支氣管哮喘,、慢性阻塞性肺疾病等,。例如在哮喘發(fā)病時，可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大,，表型也發(fā)生改變,，由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型，并分泌多種與細(xì)胞因子,；而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象,。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈長梭狀細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤（B類）；C3110D2E11
雜交瘤（B類）,；Z1510A2G6A2C7
雜交瘤（B類）,；Z2310B6B11B1G4F3C11
長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細(xì)胞；201184
家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,；2012083MSC
豚鼠心肌成纖維樣細(xì)胞,；2011104H
豚鼠肋肌成纖維樣細(xì)胞,；2011104R
豚鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞；2011104S
豚鼠肺成纖維樣細(xì)胞,；2011104L
小鼠肺成纖維樣細(xì)胞,；2011109L
北松鼠肺成纖維樣細(xì)胞；2011124L
北松鼠腎成纖維樣細(xì)胞,；2011124K
中國倉鼠卵巢細(xì)胞,；CTLA4Ig-24
北松鼠心肌成纖維樣細(xì)胞；2011124H
人羊膜細(xì)胞,；WISH
WLN Medium
氯硝胺18%甘油(DG18)瓊脂
DG18 Agar
30%葡萄糖溶液(PH6.5±0.5)
30% Dextrose Broth
0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液
YPDA培養(yǎng)基
YPDA Medium
DTM添加劑1
DTM添加劑2
兔支氣管平滑肌細(xì)胞霉素麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基
察氏液體培養(yǎng)基
無機(jī)鹽培養(yǎng)基
Inorganic Salt Medium
馬鈴薯液體培養(yǎng)基（含霉素）
化工儀器網(wǎng)