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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2082 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 正常腎臟組織 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 不規(guī)則,，含足突細胞 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔腎足細胞 | 商品貨號 | A01X2082 |
組織來源 | 正常腎臟組織 | 產品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 本細胞為終末分化細胞,，增殖能力很弱,，建議客戶收到細胞后直接用于后續(xù)實驗，不要進行擴增培養(yǎng),。 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 不規(guī)則,，含足突細胞 |
細胞簡介 |
腎小球為過濾器，腎小球毛細血管壁構成過濾膜,。腎小球過濾膜從內到外有三層結構：內層為內皮,、中層為腎小球基膜、外層為上皮細胞層,，上皮細胞又稱足細胞,，其不規(guī)則突起稱足突，其間有許多狹小間隙,，血液經濾膜過濾后,，濾液入腎小球囊。在正常情況下，血液中絕大部分蛋白質不能濾過而保留于血液中,，僅小分子物質如尿素,、葡萄糖、電解質及某些小分子蛋白能濾過,。 腎足細胞即腎小球上皮細胞,，它附著于腎小球基底膜的外側，連同腎小球基底膜和腎小球基膜一起構成了腎小球血液濾過屏障,。又由于正常成年機體的腎臟足細胞是一種終末分化細胞,，體外培養(yǎng)的原代細胞不能增殖。 足細胞呈星型多突狀,，胞體較大,，由胞體伸出許多突起，呈指狀交叉覆蓋于腎小球基底膜外表面,，并通過黏附分子和蛋白多糖分子與腎小球基底膜相連,。 足細胞在正常情況下可以分泌腎小球基底膜的主要組成成分IV型膠原和纖維連接蛋白,在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解腎小球基底膜作用的基質金屬蛋白酶和組織蛋白酶，從而在腎小球基底膜的代謝平衡中發(fā)揮重要作用,。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代腎足細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。
五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
公司正在出售的產品：
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硝酸鹽肉湯
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葡萄糖酪胨瓊脂
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多粘菌（1萬單位）
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脫纖維羊血
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粘菌素B（1000IU*5）
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈不規(guī)則,，含足突細胞，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
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