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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2046 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 正常食管組織 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 長梭形,，不規(guī)則細胞 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔食管平滑肌細胞 | 商品貨號 | A01X2046 |
組織來源 | 正常食管組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 根據(jù)細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 長梭形,，不規(guī)則細胞 |
細胞簡介 |
食管可分為頸段,、胸段和腹段。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,，胸段位于左,、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,，腹段很短與胃相連,。哺乳動物的食管結構上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層,、肌層和外膜,。其中，肌層,，上1/3段為骨骼肌,，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成,。其肌纖維的排列為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。 食管還有括約肌,，位于人環(huán)狀軟骨水平的,稱為食管上括約肌;位于食管下端,一部分在膈上,，穿過膈孔，另一部分在膈下的高壓帶,，稱為食管下括約肌,。 食管平滑肌瘤是起源于食管平滑肌的良性腫瘤，發(fā)生部位多見于食管中段,，其次為下段,，頸段罕見,。臨床上大多數(shù)病變發(fā)生在壁間，其余可在腔內(nèi),，外膜下及少數(shù)呈彌漫型,，使食管肌層呈廣泛瘤樣增生。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代平滑肌細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質。
五,、大腦皮質放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人整合SV40基因的乳腺上皮細胞；HBL-100[HBL100]
大鼠腎小球系膜細胞,；HBZY-1
人胰腺癌細胞,；HS766T
大鼠胰島細胞瘤細胞；INS-1
人肝癌細胞,；Hep3b
人子宮內(nèi)膜腺癌細胞,；KLE
人乳腺癌細胞；MDA-MB-361
人淋巴母細胞（EBV轉化）,；NCI-BL2009
人乳腺導管癌細胞；MDA-MB-134Ⅵ
人肺腺癌細胞,；NCI-H2009
豬腎細胞,；PK(15)
大鼠胰島β細胞瘤細胞,；RIN-m5F
小鼠骨髓瘤細胞；P3/NSI/1-Ag4-1
雜交瘤（B類）,；Z51B3C10H12A12G2F7E7
SV-40轉化肺成纖維細胞,；WI38/VA13
NGKG Medium
產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌,、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基
D-環(huán)
D-cycloserine
產(chǎn)芽孢肉湯
Sporulation Broth
粘菌素B（1.2mg）
Polymyxin B
多價蛋白胨-酵母膏（PY）培養(yǎng)基
Poly Peptone Yeast Extract Medium
兔食管平滑肌細胞動力-硝酸鹽培養(yǎng)基
Power - nitrate medium
梭菌鑒別瓊脂（DCA）
Differentia Clostridial Agar
強化梭菌鑒別瓊脂（DRCA）
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈長梭形，不規(guī)則細胞,，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
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