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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2225 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 正常牙組織 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維樣細胞 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔牙周膜成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X2225 |
組織來源 | 正常牙組織 | 產品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 根據細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維樣細胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代成纖維細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細胞簡介 |
牙周膜由致密結締組織所構成，牙周膜內有神經,、血管,、淋巴和上皮細胞,。 牙周膜成纖維細胞是牙周膜中主要的細胞，其功能是參與膠原蛋白的合成與吸收,，使牙周膜中的膠原能不斷更新,；還與基質形成有關。 作為牙周膜的主體細胞,參與了牙周組織的病變,、修復及再生過程?，F在, 利用牙周膜細胞建立體外模型, 已經成為有關人員研究牙周組織疾病的重要手段。 |
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。
五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈成纖維樣細胞,，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
人絨毛膜癌細胞,；JEG-3
人外周血淋巴細胞系,；MC/CAR
人B淋巴瘤細胞；Farage
人外周血淋巴細胞系,；U266B1
人視網膜上皮細胞,；ARPE-19
抗鼠CD4單克隆細胞；YTS191.1.2
抗鼠CD8單克隆細胞,；YTS169.4.2.1
抗鼠CD8單克隆細胞系,；YTS156.7.7
人前列腺癌細胞；2B4
人肺巨細胞癌細胞,；PLA-801D
人肺巨細胞癌高轉移系,；PGBE1
抗鼠CD4單克隆細胞；YTA3.1.2
人宮頸癌細胞,；Hela229[HeLa229]
人骨肉瘤細胞,；HOS
人胚腎細胞-F克隆,；293F
MUG Medium
卵黃高鹽瓊脂基礎
Egg-Yolk Salt Agar Base
抗生素檢定培養(yǎng)基2號（低PH）(05藥典)
Antibiotic Agar NO.2
2010版中國藥典培養(yǎng)基
察氏瓊脂
Czapek Dox Agar
產毒培養(yǎng)基
Toxin-Producing Medium
兔牙周膜成纖維細胞高鹽察氏瓊脂
Salt Czapek Dox Agar
玉米粉瓊脂
Corn Meat Medium
孟加拉紅培養(yǎng)基（虎紅培養(yǎng)基）
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