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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1818 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 正常肝臟組織 | 種屬來(lái)源 | 小鼠 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、巨噬細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠肝Kuffer細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1818 |
組織來(lái)源 | 正常肝臟組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來(lái)源 | 小鼠 | 傳代特性 | 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形,、巨噬細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代巨噬細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
小鼠枯否細(xì)胞分離自肝臟組織,；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化,、儲(chǔ)存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官,，位于機(jī)體中的腹部位置,，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,，胃的上方,。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹,，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接?？莘袷霞?xì)胞(Kupffer細(xì)胞)是肝臟的肝血竇內(nèi)一些固定于竇壁的巨噬細(xì)胞,，它能吞噬和清除大部分從腸道來(lái)的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血竇中的細(xì)菌,、異物和衰老的紅細(xì)胞,，并把血紅蛋白分解成紅素。此外,，肝巨噬細(xì)胞也有處理抗原,，誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖，參與免疫調(diào)節(jié)的作用,?？莘袷霞?xì)胞和一般巨噬細(xì)胞不同，枯否氏細(xì)胞不具有增加抗原免疫原性的能力,，相反有消除或減弱抗原性的作用,。枯否氏細(xì)胞能吞噬來(lái)自血液循環(huán)的抗原抗體復(fù)合物和其他有害物質(zhì),，以消除這些物質(zhì)對(duì)機(jī)體的損害,。枯否細(xì)胞功能障礙可導(dǎo)致腸源性內(nèi)毒素血癥,。電鏡下有很多皺褶和微絨毛,。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈梭形、巨噬細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤細(xì)胞株；6D7
小鼠骨髓雜交瘤細(xì)胞,；6E11
雜交瘤細(xì)胞株,；F8-M-01
雜交瘤細(xì)胞株；3D8
抗H9亞型流感病毒HA蛋白小鼠雜交瘤細(xì)胞株,；S1B1
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞,；CHO-rFVIII-11
雜交瘤細(xì)胞株；A5-E10
雜交瘤細(xì)胞株,；11F10
雜交瘤細(xì)胞株,；K3L35
雜交瘤細(xì)胞株；K3L25
雜交瘤細(xì)胞株,；12E6
雜交瘤細(xì)胞株,；7P1-7
雜交瘤細(xì)胞株；7P1-11
雜交瘤細(xì)胞株,；FLUA-1A5
雜交瘤細(xì)胞株,；WV-SPB-11
Brucella Selective Medium
C.L.E.D培養(yǎng)基
C.L.E.D Medium
C.L.E.D培養(yǎng)基添加劑
C.L.E.D Medium Supplement
GC瓊脂
GC Agar
PEA瓊脂
HB7035
艾格瓊脂
小鼠肝Kuffer細(xì)胞Eugonic Agar
NTM培養(yǎng)基
NTM Medium
TM培養(yǎng)基
Thayer Martin Agar
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