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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1817 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 肝臟組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 內(nèi)皮細胞樣 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠肝竇內(nèi)皮細胞 | 商品貨號 | A01X1817 |
組織來源 | 肝臟組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 內(nèi)皮細胞樣 |
細胞簡介 |
小鼠肝竇內(nèi)皮細胞細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,，并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機體內(nèi)臟里大的器官，位于機體中的腹部位置,，在右側(cè)橫隔膜之下,，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方,。肝臟是機體消化系統(tǒng)中大的消化腺,，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復蓋,，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接,。肝竇內(nèi)皮細胞(SEC)是肝臟內(nèi)所占比例高的非實質(zhì)細胞,，位于肝竇腔與肝細胞之間，具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運,、吞噬,、抗原提呈、免疫耐受等功能,。SEC由于擁有一般細胞所沒有的窗孔結構,、細胞間連結松散、內(nèi)皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性,，從而達到快速交換各種大小分子的目的,。肝在遭到多種病原侵襲時，肝竇內(nèi)皮細胞窗孔逐漸減少或消失,，內(nèi)皮下基膜形成,，產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細血管的結構，這一過程稱為肝竇毛細血管化,。它由多種因素引起，其過程極復雜,，在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn),，近年來受到廣泛關注。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
缺氧誘導的綠色熒光蛋白標記的人乳腺癌細胞；MDA-MB-231-hiGFP-10C
缺氧誘導的綠色熒光蛋白標記的小鼠乳腺癌細胞,；Ca761-hiGFP-3C
缺氧誘導的綠色熒光蛋白標記的小鼠乳腺癌細胞,；Ca761-hiGFP-1C2
表達人堿性成纖維細胞生長因子的人乳腺癌細胞；MCF7-bFGF-EGFP
表達人堿性成纖維細胞生長因子的小鼠乳腺癌細胞,；Ca761-bFGF-EGFP
綠色熒光蛋白標記的小鼠乳腺癌細胞,；Ca761-EGFP
表達人堿性成纖維細胞生長因子的人乳腺癌細胞；MDA-MB-231-bFGF-EGFP
紅色熒光蛋白標記的小鼠宮頸癌細胞,；U14-RFP
綠色熒光蛋白標記的人結腸癌細胞,；HCT116-CFP
綠色熒光蛋白標記的人乳腺癌細胞；MCF7-EGFP
綠色熒光蛋白標記的人胚腎細胞；293T-EGFP
紅色熒光蛋白標記的人胚腎細胞,；293T-tdT
紅色熒光蛋白和螢光素酶標記的人胚腎細胞,；293T-Luc2-tdT
紅色熒光蛋白標記的人胚腎細胞；293T-mCherry
紅色熒光蛋白標記的小鼠黑色素瘤細胞,；B16-F10-tdT
photobacterium Medium
產(chǎn)組胺菌培養(yǎng)基
Histamine producing bacteria Medium
脫脂奶蔗糖胰蛋白胨瓊脂
SkimMilkSucroseCaseinDigest Agar Medium
BSSA瓊脂培養(yǎng)基
BSSA agar medium
革蘭氏陰性菌（G-）選擇性培養(yǎng)基
Gram Negative Bacteria Selective Medium
幽門螺旋桿菌固體培養(yǎng)基
小鼠肝竇內(nèi)皮細胞Helicobacter Pylori Medium
幽門螺旋桿菌培養(yǎng)基（液體）
Helicobacter Pylori Medium
M1培養(yǎng)基
M1 Medium
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