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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2018 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 正常心臟組織 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 長柱狀,，不規(guī)則細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 兔心肌細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X2018 |
組織來源 | 正常心臟組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 本細(xì)胞為終末分化細(xì)胞,，增殖能力很弱,，建議客戶收到細(xì)胞后直接用于后續(xù)實驗，不要進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng),。 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 長柱狀,，不規(guī)則細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞簡介 |
心肌的工作細(xì)胞包括心房肌和心室肌。心肌細(xì)胞為短柱狀,，一般只有一個細(xì)胞核,，心肌細(xì)胞之間有閏盤結(jié)構(gòu)。該處細(xì)胞膜凹凸相嵌，并特殊分化形成橋粒,，彼此緊密連接,，但心肌細(xì)胞之間并無原生質(zhì)的連續(xù)。 心肌細(xì)胞的細(xì)胞核多位于細(xì)胞中部,，形狀似橢圓或似長方形,，其長軸與肌原纖維的方向一致。肌原纖維繞核而行,，核的兩端富有肌漿,，其中含有豐富的糖原顆粒和線粒體，以適應(yīng)心肌持續(xù)性節(jié)律收縮活動的需要,。 |
原代細(xì)胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈長柱狀，不規(guī)則細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗,。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤細(xì)胞,；2D8F9H12
雜交瘤細(xì)胞,；4E5F4A11
雜交瘤細(xì)胞,；6B8D11H12
乳腺癌耐藥細(xì)胞；bads200
乳腺癌耐藥細(xì)胞,；bast72
人源肝癌細(xì)胞,；LIXC-002
雜交瘤細(xì)胞；2G4
人源肝癌細(xì)胞,；LIXC-004
雜交瘤細(xì)胞,；D3-D3
人骨肉瘤細(xì)胞；U2OSE6Tet6
雜交瘤細(xì)胞,；41002
雜交瘤細(xì)胞,；TBEF3
人源胰腺癌細(xì)胞；PAXC-010
雜交瘤細(xì)胞,；TBCD6
雜交瘤細(xì)胞,；TBEA8
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FT）
Thiolglycollate Medium
腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基
Brain-extracted agar Baptist Heart
營養(yǎng)瓊脂(水質(zhì)監(jiān)測)
Nutrient Agar
腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基
Brain-Heart Baptist extraction liquid medium
KF鏈球菌瓊脂
KF Streptococcus Agar
兔心肌細(xì)胞大腸菌群顯色培養(yǎng)基
Coliform Chromogenic Medium
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
Lactose Peptone Broth
遠(yuǎn)藤瓊脂(品紅亞硫酸鈉)培養(yǎng)基
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