化工儀器網
產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2018 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 正常心臟組織 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 長柱狀,，不規(guī)則細胞 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔心肌細胞 | 商品貨號 | A01X2018 |
組織來源 | 正常心臟組織 | 產品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 本細胞為終末分化細胞，增殖能力很弱,，建議客戶收到細胞后直接用于后續(xù)實驗,，不要進行擴增培養(yǎng)。 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 長柱狀,，不規(guī)則細胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代心肌細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細胞簡介 |
心肌的工作細胞包括心房肌和心室肌,。心肌細胞為短柱狀，一般只有一個細胞核,，心肌細胞之間有閏盤結構,。該處細胞膜凹凸相嵌，并特殊分化形成橋粒,，彼此緊密連接,，但心肌細胞之間并無原生質的連續(xù),。 心肌細胞的細胞核多位于細胞中部,，形狀似橢圓或似長方形,，其長軸與肌原纖維的方向一致。肌原纖維繞核而行,，核的兩端富有肌漿,，其中含有豐富的糖原顆粒和線粒體，以適應心肌持續(xù)性節(jié)律收縮活動的需要,。 |
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。
五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈長柱狀，不規(guī)則細胞,，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內,；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產品：
雜交瘤細胞；2D8F9H12
雜交瘤細胞,；4E5F4A11
雜交瘤細胞,；6B8D11H12
乳腺癌耐藥細胞；bads200
乳腺癌耐藥細胞,；bast72
人源肝癌細胞,；LIXC-002
雜交瘤細胞；2G4
人源肝癌細胞,；LIXC-004
雜交瘤細胞,；D3-D3
人骨肉瘤細胞；U2OSE6Tet6
雜交瘤細胞,；41002
雜交瘤細胞,；TBEF3
人源胰腺癌細胞；PAXC-010
雜交瘤細胞,；TBCD6
雜交瘤細胞,；TBEA8
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FT）
Thiolglycollate Medium
腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基
Brain-extracted agar Baptist Heart
營養(yǎng)瓊脂(水質監(jiān)測)
Nutrient Agar
腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基
Brain-Heart Baptist extraction liquid medium
KF鏈球菌瓊脂
KF Streptococcus Agar
兔心肌細胞大腸菌群顯色培養(yǎng)基
Coliform Chromogenic Medium
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
Lactose Peptone Broth
遠藤瓊脂(品紅亞硫酸鈉)培養(yǎng)基
化工儀器網