化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1965 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 脊髓組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠脊髓成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X1965 |
組織來源 | 脊髓組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳3代左右 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
細胞簡介 |
小鼠脊髓成纖維細胞分離自脊髓組織,；脊髓是細細的管束狀的神經(jīng)結構,，位于脊柱的椎管內且被脊椎保護；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分,。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細胞依靠復雜的聯(lián)系來處理傳遞信息,。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,，在椎管里面,，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng),，分布到四肢,、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形(蝴蝶型)灰質區(qū),，主要由神經(jīng)細胞構成,；在灰質區(qū)周圍為白質區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成,；脊髓是許多簡單反射的中樞,。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官,。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應的31節(jié),，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的,。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來,；成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的脊髓成纖維細胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁wan全,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細胞質透明,，細胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。脊髓成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持組織的正常形態(tài)；合成和釋放細胞外基質,；組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織,。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。
五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤細胞株,；3G2
轉基因小鼠細胞；MMHRL1
雜交瘤細胞株,；1G9
雜交瘤細胞株,；1C1
雜交瘤細胞株；1B6
兔正常食管上皮細胞,；RNLEC/HL-030RabbitNormalEsophagealEpithelialCellsRNEEC/HL-030
人肺腺癌細胞系,；ZLC-001
人食管鱗癌細胞系；ZEC-134
雜交瘤細胞株,；XA272-919
雜交瘤細胞株,；XA272-907
雜交瘤細胞株；XA272-917
雜交瘤細胞株,；XA272-918
雜交瘤細胞株,；XA272-915
MAL基因敲除鼠舌鱗癌細胞系,；Mca-T-MAL
雜交瘤細胞株；XA272-908
匹克氏肉湯基礎A
肉浸液肉湯培養(yǎng)基
疊氮鈉萄糖肉湯
乙基紫疊氮鈉肉湯
KF鏈球菌瓊脂
CIN-1培養(yǎng)基基礎
改良Y培養(yǎng)基
改良磷鹽緩沖液PSB
營養(yǎng)肉湯（NB）
營養(yǎng)瓊脂（NA）
小鼠脊髓成纖維細胞改良番茄汁培養(yǎng)基
MC培養(yǎng)基
緩沖蛋白胨水（BPW）
亞硒鹽胱氨增菌液（SC）
膽硫乳瓊脂（DHL）
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣,，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內,；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
化工儀器網(wǎng)