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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1911 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 正常關(guān)節(jié)組織 | 種屬來(lái)源 | 小鼠 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維樣細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱(chēng) | 小鼠滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1911 |
組織來(lái)源 | 正常關(guān)節(jié)組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來(lái)源 | 小鼠 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維樣細(xì)胞 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
滑膜是關(guān)節(jié)囊的內(nèi)層，淡紅色,，平滑閃光,，薄而柔潤(rùn)，由疏松結(jié)締組織組成,。關(guān)節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu),，除關(guān)節(jié)軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過(guò)關(guān)節(jié)腔的肌腱,、韌帶等均全部為滑膜所包裹,。 關(guān)節(jié)軟骨一旦損傷將很難修復(fù)，運(yùn)用自體軟骨細(xì)胞移植技術(shù)治療軟骨損傷,，效果較好,，但由于細(xì)胞來(lái)源不足以及取材造成的取材部位發(fā)生病變等因素，使其應(yīng)用受到限制,。 間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）具有高度增殖和多向分化潛能的特性。其中,，滑膜中間充質(zhì)干細(xì)胞的比例較高,，少量的標(biāo)本就可獲得足量的滑膜MSCs。此外,，由于其具有比骨髓,、脂肪等來(lái)源的MSCs更好的成軟骨、成骨,、成脂肪等多分化能力和更強(qiáng)的集落形成能力等吸引了許多研究者對(duì)其進(jìn)行深入研究,。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維樣細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤細(xì)胞株,；AbM-F14FTSSCLS0167-KLH#15
人肝癌細(xì)胞,；LIXC-501
雜交瘤細(xì)胞株,；4F12
雜交瘤細(xì)胞株,；7B5
雜交瘤細(xì)胞株,；7F1
雜交瘤細(xì)胞株；1C6
小鼠骨髓干細(xì)胞系；MBMME1
雜交瘤細(xì)胞株；DC-C
小鼠骨髓干細(xì)胞系；MBMME2
雜交瘤細(xì)胞株,；1C12
人成纖維細(xì)胞,；HF-1
人食管鱗癌細(xì)胞系；ZEC-127
人食管鱗癌細(xì)胞系,；ZEC-145
兔正常角膜上皮細(xì)胞；RNCEC/HL-032RabbitNormalCornealEpithelialCellsRNCEC/HL-032
人食管鱗癌細(xì)胞系,；ZEC-166
察氏瓊脂
產(chǎn)毒培養(yǎng)基
高鹽察氏瓊脂
玉米粉瓊脂
孟加拉紅培養(yǎng)基
菌種培養(yǎng)基
四環(huán)檢定瓊脂
亞硫鹽瓊脂
布氏肉湯
改良Skirrow氏瓊脂基礎(chǔ)
小鼠滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞改良Camp-BAP氏瓊脂基礎(chǔ)
TTC瓊脂基礎(chǔ)
甘氨培養(yǎng)基
快速硫化氫試驗(yàn)瓊脂
DNA甲基綠瓊脂基礎(chǔ)
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