小鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人肝癌細(xì)胞Mahlavu(STR鑒定正確)Halobacterium sp.鹽桿菌人胚腎細(xì)胞-F克隆 293F(STR鑒定正確)Burkholderia caryophylli石竹伯克霍爾德氏菌人肺腺癌細(xì)胞ABC-1(STR鑒定正確)Lactobacillus gasseri格氏乳桿菌人非霍奇金淋巴瘤Karpas 422(STR鑒定正確)Flavobacterium

一,、細(xì)胞基本屬性：

包被條件： 

培養(yǎng)基：原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

原代細(xì)胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤細(xì)胞株；H1A2

雜交瘤細(xì)胞株,；2F8
雜交瘤細(xì)胞株,；F3A2
雜交瘤細(xì)胞株,；CH3
雜交瘤細(xì)胞株,；2F2
雜交瘤細(xì)胞株；4G1
雜交瘤細(xì)胞株,；1C8
雜交瘤細(xì)胞株,；4F2
人乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞株；MCF-7/ROS
穩(wěn)定表達(dá)GFP的shRNA靶向干擾YB-1基因人肺腺癌A549細(xì)胞株,；A549/YBX1-homo-326
雜交瘤細(xì)胞株,；1H9
分泌抗豬SC蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；4H11
過表達(dá)CADM1的骨肉瘤細(xì)胞株,；U-2os-CADM1
穩(wěn)定表達(dá)GFP的shRNA靶向干擾YB-1基因人肺腺癌A549細(xì)胞株,；A549/YBX1-homo-746
雜交瘤細(xì)胞株；12G6
NTM培養(yǎng)基
NTM Medium
TM培養(yǎng)基
Thayer Martin Agar
YNB培養(yǎng)基
YNB Medium
BF839菌計數(shù)選擇培養(yǎng)基
BF839 Bacterium Count Selective Medium
硫細(xì)菌培養(yǎng)基
Medium-sulfur bacteria
小鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化三甲胺培養(yǎng)基
TMAO Medium
BM液體培養(yǎng)基

BM固體培養(yǎng)基
Iron瓊脂

原代細(xì)胞使用方法：

是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣,，多角形細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。