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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1828 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 腸組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 巨噬細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠腸巨噬細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1828 |
組織來源 | 腸組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群,；不建議傳代； |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 巨噬細(xì)胞樣 |
細(xì)胞簡介 |
小鼠腸巨噬細(xì)胞分離自腸道組織,；腸道指的是從胃幽門至gang門的消化管,。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段,。哺乳動物的腸包括小腸,、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的,，大腸主要濃縮食物殘渣,，形成糞便,，再通過直腸經(jīng)gang門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化,、吸收食物,，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng),。巨噬細(xì)胞屬于免疫細(xì)胞,，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬,、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象,。巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能,，是研究細(xì)胞吞噬,、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。巨噬細(xì)胞較易獲得,，便于培養(yǎng),，并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群,，在條件適宜下可生活2-3周,，多用做原代培養(yǎng)，難以長期生存,。巨噬細(xì)胞(Macrophages)是一種位于組織內(nèi)的白血球,，源自單核細(xì)胞，而單核細(xì)胞又來源于骨髓中的前體細(xì)胞,。巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞皆為吞噬細(xì)胞,，在脊椎動物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)(先天性免疫)和特異性防衛(wèi)(細(xì)胞免疫)。它們的主要功能是以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用(即吞噬以及消化),，并激活淋巴球或其他免疫細(xì)胞,，令其對病原體作出反應(yīng)。 |
包被條件： -
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：利多ka因(12mM)
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
原代細(xì)胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈巨噬細(xì)胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗,。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；PEAA2D8
小鼠雜交瘤細(xì)胞株,；DMZ1D5
小鼠抗人IgM雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgM-489
小鼠抗人IgM雜交瘤細(xì)胞；mAbhIgM-491
小鼠抗人kappa雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgκ-490
小鼠抗人kappa雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgκ-488
小鼠抗人IgA雜交瘤細(xì)胞；mAbhIgA-492
小鼠抗人IgA雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgA-493
小鼠抗人IgA雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgA-494
小鼠抗人IgA雜交瘤細(xì)胞；mAbhIgA-495
小鼠抗人IgE雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgE-496
小鼠抗人IgE雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgE-497
小鼠抗人IgE雜交瘤細(xì)胞；mAbhIgE-500
小鼠抗人IgE雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgE-499
小鼠抗人IgE雜交瘤細(xì)胞,；mAbhIgE-498
戊烷脒
Pentane Amidine
炭疽桿菌疫苗
HB6260
炭疽病診斷血清（陰性）
炭疽桿菌噬菌體
Bacillus anthracis phage
炭疽桿菌診斷抗原
Diagnostic Antigen of Bacillus anthracis
青霉敏感紙片
小鼠腸巨噬細(xì)胞Penicillin-sensitive paper
碘伏（液體）
Povidone-iodine (liquid)
溶菌
Lysozyme
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