小鼠海綿體內(nèi)皮細胞的相關產(chǎn)品：小鼠結腸癌帶綠色熒光MC-38+GFP（種屬鑒定）Azotobacter vinelandii維氏自生固氮菌SV40轉化的非洲綠猴腎細胞COS-7（種屬鑒定）Corynebacterium sp.棒桿菌人結直腸癌細胞熒光標記 LOVO+luc (STR鑒定正確)Bacillus subtilis枯草芽孢桿菌人急性淋巴母細胞性白血病細胞MOLT-4(STR鑒定正確)En

一、細胞基本屬性：

包被條件： PLL(0.1mg/ml),，明膠(0.1%)

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。

五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：
兔正常肝細胞；RNH/HL-034RabbitNormalHepatocytesRNH/HL-034

人外陰上皮內(nèi)不典型增生細胞,；VINC/HL-024VulvalIntraepurhelialNeoplasiaCellsVINC/HL-024
原位前列腺癌NOD/SCID鼠的循環(huán)腫瘤細胞,；MPC2013
大鼠正常子宮內(nèi)膜細胞；RNEEC/HL-036RatNormalEndocervicalEpithelialCellsRNEEC/HL-036
兔正常氣管上皮細胞,；RNTEC/HL-035RabbitNormalTrachealEpithelialCellsRNTEC/HL-035
人肺癌細胞,；HLCC/HL-023HumanLungCancerCellsHLCC/HL-023
小鼠正常附睪上皮細胞；MNEEC/HL-037MurineNormalEpididymalEpithelialCellsMNEEC/HL-037
雜交瘤細胞株,；4C7
抗B亞群禽白血病病毒雞胚成纖維細胞,；DF-1/B
抗K亞群禽白血病病毒雞胚成纖維細胞；DF-1/K
Vero/DogSLAM細胞系Vero/DogSLAM-1F5株,；Vero/DogSLAMCellline,strainVero/DogSLAM-1F5
雜交瘤細胞株；CH-4E8
雜交瘤細胞株,；CH-3C1
雜交瘤細胞株,；SZ-163
雜交瘤細胞株；LH3A8C2
馬鈴薯萄糖瓊脂（PDA）顆粒
李氏菌增菌肉湯（LB1,LB2）基礎顆粒
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液顆粒
GN增菌液顆粒
氯化鈉蛋白胨緩沖液顆粒
MLCB寒天培地顆粒
麥康凱液體培養(yǎng)基
胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 (TSB)
氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基
紫紅膽鹽萄糖瓊脂培養(yǎng)基
小鼠海綿體內(nèi)皮細胞LB肉湯顆粒
顯色培養(yǎng)基系列
MUG培養(yǎng)基

茜-β-半乳糖苷瓊脂(Aliz-gal瓊脂)
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣,，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。