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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1912 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 毛囊組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠毛囊干細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1912 |
組織來源 | 毛囊組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳3代左右 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形,、多角形 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞簡介 |
小鼠毛囊干細(xì)胞分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細(xì)胞連續(xù)形成的袋樣上皮,。其基底是真皮凹進(jìn)的真皮毛乳頭,，中心是一根毛發(fā)，立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上,，附著點(diǎn)的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸,，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中,，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度,，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個(gè)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織,。毛囊干細(xì)胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一種細(xì)胞,。毛囊干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞，在體內(nèi)處于靜止?fàn)顟B(tài),，在體外培養(yǎng)作用下表現(xiàn)出驚人的增殖能力,。研究發(fā)現(xiàn)，毛囊干細(xì)胞具有多向分化潛能,，它可以分化成表皮,、毛囊、皮脂腺,，參與皮膚創(chuàng)傷愈合的過程,。毛囊干細(xì)胞和其它成體干細(xì)胞一樣，具有慢周期性,、未分化性,、自我更新和體外增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn),。毛囊干細(xì)胞分化經(jīng)毛囊干細(xì)胞(hair follicle stem cells，F(xiàn)SC),、短暫增殖細(xì)胞(transit amplifying cells,，TAC)有絲分裂后分化細(xì)胞(postmitotic differentiating cells，PDC)三個(gè)階段,。毛囊干細(xì)胞在光鏡下呈立方形,，細(xì)胞體積小，核漿比率大,，表面光滑,，皺褶少,，又被稱為非鋸齒形細(xì)胞,，細(xì)胞體積的增大與增殖能力呈負(fù)相關(guān)。超微結(jié)構(gòu)顯示細(xì)胞表面有少許微絨毛,，細(xì)胞核存在許多卷曲,，染色質(zhì)彌散分布，這些形態(tài)特征均表現(xiàn)出原始細(xì)胞的特性,。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈梭形,、多角形,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠卵巢顆粒細(xì)胞
大鼠卵巢內(nèi)膜細(xì)胞
大鼠卵泡膜細(xì)胞
大鼠脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞
大鼠脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠毛囊干細(xì)胞
大鼠毛囊角質(zhì)細(xì)胞
大鼠腦動脈平滑肌細(xì)胞
大鼠腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠腦膜細(xì)胞
大鼠腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞
大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠腦血管成纖維細(xì)胞
大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞
大鼠膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞
SIM動力培養(yǎng)基
吖啶黃（2.5mg/支）
檸檬鐵銨（0.05g/支）
麥芽浸膏湯
皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)
皰肉牛肉粒
含225ml7.5%氯化鈉肉湯均質(zhì)袋
含0mlBolton肉湯均質(zhì)袋
馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基
無機(jī)鹽瓊脂培養(yǎng)基
小鼠毛囊干細(xì)胞卵黃雙抗培養(yǎng)基（EPV）
礦物鹽瓊脂
MIU培養(yǎng)基
改良Skirrow瓊脂平板
CIN-1瓊脂平板9cm
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