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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1787 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 正常股動脈組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 長梭形,，不規(guī)則細胞 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠股動脈平滑肌細胞 | 商品貨號 | A01X1787 |
組織來源 | 正常股動脈組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 根據(jù)細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 長梭形,，不規(guī)則細胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代平滑肌細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
股動脈是下肢動脈的主干,，由髂外動脈延續(xù)而來,。在腹股溝韌帶中點的深面入股三角。在股三角內(nèi),，股動脈先位于股靜脈的外側(cè),，逐漸從外側(cè)跨到股靜脈的前方，下行入收肌管,，再穿收肌腱裂孔至腘窩,，易名腘動脈。股動脈在腹股溝中點處位置表淺,，可摸到搏動,，是臨床上急救壓迫止血和進行穿刺的部位。 動脈疾病發(fā)生的一個主要因素是由于血管平滑肌細胞轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型,。近期的研究表明平滑肌細胞能表達鈣離子通道,，ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表達可能是造成血管壁炎癥反應(yīng),，并進一步造成血管疾病的原因 ,。因此，對動脈血管平滑肌細胞的體外培養(yǎng)和研究可用來發(fā)現(xiàn)和確定新的血管疾病的靶向治療方法,。 |
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈長梭形,，不規(guī)則細胞，在技術(shù)部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
突變型Cas9穩(wěn)定表達的人肝癌細胞；Li-7-mCas9-761
Cas9穩(wěn)定表達的人肝癌細胞,；Li-7-Cas9-755
Cas9穩(wěn)定表達的人肝癌細胞,；Li-7-Cas9-759
突變型Cas9穩(wěn)定表達的人肝癌細胞；Li-7-mCas9-762
突變型Cas9穩(wěn)定表達的人肝癌細胞,；Li-7-mCas9-763
突變型Cas9穩(wěn)定表達的人肝癌細胞,；Li-7-mCas9-764
Cas9穩(wěn)定表達的人膽囊癌細胞；GBC-SD-Cas9-766
Cas9穩(wěn)定表達的人膽囊癌細胞,；GBC-SD-Cas9-768
Cas9穩(wěn)定表達的人膽囊癌細胞,；GBC-SD-Cas9-767
Cas9穩(wěn)定表達的人膽囊癌細胞；GBC-SD-Cas9-769
Cas9穩(wěn)定表達的人膽囊癌細胞,；GBC-SD-Cas9-771
Cas9穩(wěn)定表達的人膽囊癌細胞,；GBC-SD-Cas9-773
突變型Cas9穩(wěn)定表達的人肝癌細胞；Li-7-mCas9-765
Cas9穩(wěn)定表達的人膽囊癌細胞,；GBC-SD-Cas9-772
Cas9穩(wěn)定表達的人膽囊癌細胞,；GBC-SD-Cas9-774
改良Skirrow氏瓊脂平板（9cm）
卵黃多粘菌素瓊脂平板（9cm）
BCYE-CYS瓊脂平板（9cm）
改良CCDA瓊脂平板（9cm）
大豆酪蛋白瓊脂（TSA）培養(yǎng)基平板9cm
含素酶TSA平板
沙氏瓊脂平板9cm（2~25℃）
SDC(TSA W/TTC)平板
含225ml磷酸鹽緩沖液均質(zhì)袋
含90ml磷酸鹽緩沖液均質(zhì)袋
小鼠股動脈平滑肌細胞含225ml 緩沖蛋白胨水（BPW）均質(zhì)袋
含900ml緩沖蛋白胨水（BPW）均質(zhì)袋
含90ml 緩沖蛋白胨水（BPW）均質(zhì)袋
含100ml 緩沖蛋白胨水（BPW）均質(zhì)袋
含225ml 3%氯化鈉堿性蛋白胨水均質(zhì)袋
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