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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1870 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 卵巢組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠卵巢顆粒細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1870 |
組織來源 | 卵巢組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞簡介 |
小鼠卵巢顆粒細(xì)胞分離自卵巢組織,；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素,。卵巢的位置與睪丸相同,，僅左側(cè)發(fā)育(右側(cè)已退化)，呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡,，卵泡呈黃色,，卵巢表面密布血管,。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān),。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結(jié)構(gòu),，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能,。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織,，其下方有薄層的結(jié)締組織,。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分,，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成,；髓質(zhì)位于中央，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,，其中有許多血管,、淋巴管和神經(jīng)。卵巢顆粒細(xì)胞是卵巢的主要功能細(xì)胞,，其增殖與分化直接影響著卵泡的生長啟動,、發(fā)育、排卵,、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動,。卵巢顆粒細(xì)胞是卵泡內(nèi)的大細(xì)胞群，也是主要的功能細(xì)胞,，卵泡發(fā)育的顯著標(biāo)志之一就是顆粒細(xì)胞迅速生長及增殖,，而成年動物的卵泡閉鎖主要是由顆粒細(xì)胞凋亡引起，尤其在卵泡發(fā)育后期,，此外,，顆粒細(xì)胞還與卵泡膜細(xì)胞共同完成卵巢激素的合成，維持著有利于卵母細(xì)胞生長和成熟的微環(huán)境,。細(xì)胞形狀呈圓形或橢圓形,。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞
大鼠睪丸支持細(xì)胞
大鼠膈肌細(xì)胞
大鼠宮頸上皮細(xì)胞
大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞
大鼠鞏膜上皮細(xì)胞
大鼠股動脈內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠股動脈平滑肌細(xì)胞
大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞
大鼠骨骼肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠骨骼肌細(xì)胞
大鼠骨膜干細(xì)胞
大鼠骨髓單核細(xì)胞
大鼠骨髓肥大細(xì)胞
大腸菌群顯色培養(yǎng)基
阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI瓊脂）
VRBG瓊脂
腸道菌增菌肉湯（EE）
西蒙氏枸櫞鹽培養(yǎng)基
阪崎腸桿菌成套生化鑒定管
腸球菌肉湯
腦心浸液肉湯
多粘菌B
腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基
小鼠卵巢顆粒細(xì)胞腦心浸液瓊脂（BHIA）
Pfizer腸球菌選擇性瓊脂（PSE瓊脂）
MEI培養(yǎng)基
北沙參亞碲鈉胨水培養(yǎng)基基礎(chǔ)
豆粉瓊脂
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