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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1894 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 軟骨組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠軟骨細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1894 |
組織來源 | 軟骨組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳2-3代左右 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
小鼠軟骨細(xì)胞分離自軟骨組織,；軟骨組織由軟骨細(xì)胞,、基質(zhì)及纖維構(gòu)成,。軟骨組織再生能力強(qiáng)，這些增生的幼稚細(xì)胞形似纖維母細(xì)胞,，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣?xì)胞,，并形成軟骨基質(zhì)，細(xì)胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細(xì)胞,。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同,，可將軟骨分為透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨三種,，其中以透明軟骨的分布較廣,，結(jié)構(gòu)也較典型。軟骨細(xì)胞(chondrocyte)位于軟骨陷窩內(nèi),。幼稚的軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層,，單個(gè)分布，體積較小,，呈橢圓形,，長(zhǎng)軸與軟骨表面平行，越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形,，細(xì)胞核圓形或卵圓形,，染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性,，常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成,，稱為同源細(xì)胞群,。電鏡下，軟骨細(xì)胞有突起和皺褶,，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體,。在組織切片中，軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形,，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2，5%
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈梭形,、多角形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔腹腔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
兔腹腔主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞
兔肝成纖維細(xì)胞
兔肝竇內(nèi)皮細(xì)胞
兔肝間質(zhì)細(xì)胞
兔肝卵圓細(xì)胞
兔肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞
兔肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞
兔肝外膽管上皮細(xì)胞
兔肝星狀細(xì)胞
兔睪丸間質(zhì)細(xì)胞
兔睪丸支持細(xì)胞
兔膈肌細(xì)胞
兔宮頸上皮細(xì)胞
兔鞏膜成纖維細(xì)胞
3%NaCl蔗糖
3%NaCl氨基脫羧對(duì)照
3%NaCl
3%NaCl精氨雙水解
3%NaCl賴氨脫羧
3%NaCl脫羧
MR-VP
1%NaCl
1%NaCl乳糖
小鼠軟骨細(xì)胞ONPG
賴氨脫羧肉湯
尿
1%NaCl纖維二糖
明膠
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