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詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠軟骨細胞 | 商品貨號 | A01X1894 |
組織來源 | 軟骨組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳2-3代左右 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
細胞簡介 |
小鼠軟骨細胞分離自軟骨組織,；軟骨組織由軟骨細胞,、基質(zhì)及纖維構(gòu)成。軟骨組織再生能力強,，這些增生的幼稚細胞形似纖維母細胞,，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣毎⑿纬绍浌腔|(zhì),，細胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細胞,。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨,、彈性軟骨和纖維軟骨三種,，其中以透明軟骨的分布較廣,，結(jié)構(gòu)也較典型。軟骨細胞(chondrocyte)位于軟骨陷窩內(nèi),。幼稚的軟骨細胞位于軟骨組織的表層,，單個分布，體積較小,，呈橢圓形,，長軸與軟骨表面平行，越向深層的軟骨細胞體積之間增大呈圓形,，細胞核圓形或卵圓形,，染色淺，細胞質(zhì)弱嗜堿性,，常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成,，稱為同源細胞群,。電鏡下，軟骨細胞有突起和皺褶,，細胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體,。在組織切片中，軟骨細胞收縮為不規(guī)則形,，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈梭形,、多角形，在技術(shù)部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔腹腔主動脈平滑肌細胞
兔腹腔主動脈外膜成纖維細胞
兔肝成纖維細胞
兔肝竇內(nèi)皮細胞
兔肝間質(zhì)細胞
兔肝卵圓細胞
兔肝內(nèi)膽管上皮細胞
兔肝實質(zhì)細胞
兔肝外膽管上皮細胞
兔肝星狀細胞
兔睪丸間質(zhì)細胞
兔睪丸支持細胞
兔膈肌細胞
兔宮頸上皮細胞
兔鞏膜成纖維細胞
3%NaCl蔗糖
3%NaCl氨基脫羧對照
3%NaCl
3%NaCl精氨雙水解
3%NaCl賴氨脫羧
3%NaCl脫羧
MR-VP
1%NaCl
1%NaCl乳糖
小鼠軟骨細胞ONPG
賴氨脫羧肉湯
尿
1%NaCl纖維二糖
明膠
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