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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1878 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 乳腺組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠乳腺成纖維細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1878 |
組織來源 | 乳腺組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳3代左右 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞簡介 |
小鼠乳腺成纖維細(xì)胞分離自乳腺組織,；乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間，淺筋膜伸向乳腺組織內(nèi)形成條索狀的小葉間隔,，一端連于胸肌筋膜，另一端連于皮膚,，將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中,。乳腺是哺乳動(dòng)物少數(shù)可以重復(fù)經(jīng)歷生長,、功能分化和退化過程的器官之一。纖維結(jié)締組織伸入乳腺組織之間,，形成許多間隔,，這些纖維結(jié)締組織對乳房起固定作用,，而纖維結(jié)締組織是由成纖維細(xì)胞構(gòu)成的。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的乳腺成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁wan全,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人子宮微血管內(nèi)皮細(xì)胞
兔B淋巴細(xì)胞
兔DC細(xì)胞
兔DRG神經(jīng)元細(xì)胞
兔NK細(xì)胞
兔T淋巴細(xì)胞
兔背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
兔鼻腔粘膜上皮細(xì)胞
兔表皮干細(xì)胞
兔腸間質(zhì)細(xì)胞
兔腸巨噬細(xì)胞
兔腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞
兔腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞
兔腸粘膜上皮細(xì)胞
兔成骨細(xì)胞
丙二鹽
V-P半固體瓊脂
氨基脫羧對照
MR-VP
鼠李糖發(fā)酵管
七葉苷
發(fā)酵管
木糖發(fā)酵管
硝鹽肉湯
小鼠乳腺成纖維細(xì)胞七葉苷
鼠李糖發(fā)酵管
木糖發(fā)酵管
發(fā)酵管
萄糖
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