產(chǎn)品簡介
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
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貨號 | A01X1878 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
組織來源 | 乳腺組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
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上海撫生實業(yè)有限公司 |
—— 銷售熱線 ——
18201748966 |
參考價 | ¥7750 |
5×10^5 | 7750元 | 15 瓶 可售 |
更新時間:2025-04-09 10:53:01瀏覽次數(shù):274
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
---|---|---|---|
貨號 | A01X1878 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
組織來源 | 乳腺組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
一,、細胞基本屬性:
細胞名稱 | 小鼠乳腺成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X1878 |
組織來源 | 乳腺組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳3代左右 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
包被條件:
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
傳代比例:
消化液:0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
細胞簡介 |
小鼠乳腺成纖維細胞分離自乳腺組織,;乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間,淺筋膜伸向乳腺組織內形成條索狀的小葉間隔,,一端連于胸肌筋膜,,另一端連于皮膚,將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中,。乳腺是哺乳動物少數(shù)可以重復經(jīng)歷生長,、功能分化和退化過程的器官之一。纖維結締組織伸入乳腺組織之間,,形成許多間隔,,這些纖維結締組織對乳房起固定作用,,而纖維結締組織是由成纖維細胞構成的,。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來,。成纖維細胞較大,,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化,;成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的乳腺成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起;6h后細胞基本貼壁wan全,,伸展成梭形,,胞核清晰,分布較均勻,,散在生長,,不聚集成團;細胞生長迅速,,5-7天即呈融合狀態(tài),,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,,平坦,、胞體較大,細胞質透明,,細胞核較大,,呈橢圓形,顏色淡,。細胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。 |
原代細胞實驗步驟:
一,、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,,去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜,,保留大腦皮質。
五,、大腦皮質放于DMEM中,,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),,混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,,去上清液,。
七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,,充分混勻,,1 000×g,20min,,4℃離心,,去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,,混勻,,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,,去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,,60min,4℃),,1000×g,,4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,,吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,,室溫),,去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,,4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,置于37℃,、5%CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,,隨后隔天換液。
原代細胞使用方法:
是一種貼壁細胞,,細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣,,在技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代,;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,,放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,,以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次,;
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,,37℃溫浴1-3min,;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,;
3)用吸管輕輕吹打混勻,,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,,置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),;
4)待細胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,,1000rpm,離心5min,,保留沉淀,;
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),;消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
3)經(jīng)1000rpm,,離心5min,,丟棄上清,用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,,接種于新的培養(yǎng)瓶內,;
4)待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察,;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,,需要對實驗器皿進行包被,,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗,;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),,依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人子宮微血管內皮細胞
兔B淋巴細胞
兔DC細胞
兔DRG神經(jīng)元細胞
兔NK細胞
兔T淋巴細胞
兔背根神經(jīng)節(jié)細胞
兔鼻腔粘膜上皮細胞
兔表皮干細胞
兔腸間質細胞
兔腸巨噬細胞
兔腸神經(jīng)膠質細胞
兔腸微血管內皮細胞
兔腸粘膜上皮細胞
兔成骨細胞
丙二鹽
V-P半固體瓊脂
氨基脫羧對照
MR-VP
鼠李糖發(fā)酵管
七葉苷
發(fā)酵管
木糖發(fā)酵管
硝鹽肉湯
小鼠乳腺成纖維細胞七葉苷
鼠李糖發(fā)酵管
木糖發(fā)酵管
發(fā)酵管
萄糖