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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1842 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 前列腺 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠前列腺上皮細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1842 |
組織來源 | 前列腺 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
細(xì)胞簡介 |
小鼠前列腺上皮細(xì)胞分離自前列腺組織,；前列腺(Prostate)是雄性有的性腺器官,；前列腺是不成對的實質(zhì)性器宮，由腺組織和肌組織構(gòu)成,。前列腺如栗子,，底朝上，與膀胱相貼,，尖朝下,，抵泌尿生殖膈，前面貼恥骨聯(lián)合,，后面依直腸,。前列腺腺體的中間有尿道穿過，扼守著尿道上口,，所以,，前列腺有問題時，排尿首先受影響,。前列腺是機體非常少有的,，具有內(nèi)、外雙重分泌功能的性分泌腺,。作為外分泌腺,，前列腺每天分泌前列腺液，是構(gòu)成精液主要成分,；作為內(nèi)分泌腺,，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素"。前列腺上皮細(xì)胞與前列腺的功能關(guān)系密切,，上皮細(xì)胞的損傷是前列腺炎的主要病癥,，重度的前列腺炎患者的前列腺液內(nèi)可檢測到脫落的上皮細(xì)胞，這是上皮細(xì)胞損傷的標(biāo)志,。炎癥發(fā)生時,，與炎癥相關(guān)的一些炎癥因子可能發(fā)生變化。因此,，體外培養(yǎng)前列腺上皮細(xì)胞是研究前列腺炎及前列腺上皮肉瘤等疾病的前提和基礎(chǔ),。前列腺主要特征如下：①前列腺結(jié)構(gòu)和功能活動均受雄性激素的調(diào)控；②基底細(xì)胞主要表達(dá)高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-5,、CK-14),，基底上皮細(xì)胞可分化成管腔上皮細(xì)胞；③前列腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)為研究前列腺的許多重要特性以及化學(xué)和激素性致癌作用提供了機會,。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
原代細(xì)胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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丙二鹽
水楊苷發(fā)酵管
賴氨脫羧肉湯
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗,。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
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