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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1842 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 前列腺 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠前列腺上皮細胞 | 商品貨號 | A01X1842 |
組織來源 | 前列腺 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
細胞簡介 |
小鼠前列腺上皮細胞分離自前列腺組織；前列腺(Prostate)是雄性有的性腺器官,；前列腺是不成對的實質(zhì)性器宮,，由腺組織和肌組織構(gòu)成。前列腺如栗子,，底朝上，與膀胱相貼,，尖朝下,，抵泌尿生殖膈，前面貼恥骨聯(lián)合,，后面依直腸,。前列腺腺體的中間有尿道穿過，扼守著尿道上口,，所以,，前列腺有問題時，排尿首先受影響。前列腺是機體非常少有的,，具有內(nèi),、外雙重分泌功能的性分泌腺。作為外分泌腺,，前列腺每天分泌前列腺液,，是構(gòu)成精液主要成分；作為內(nèi)分泌腺,，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素",。前列腺上皮細胞與前列腺的功能關系密切，上皮細胞的損傷是前列腺炎的主要病癥,，重度的前列腺炎患者的前列腺液內(nèi)可檢測到脫落的上皮細胞,，這是上皮細胞損傷的標志。炎癥發(fā)生時,，與炎癥相關的一些炎癥因子可能發(fā)生變化,。因此，體外培養(yǎng)前列腺上皮細胞是研究前列腺炎及前列腺上皮肉瘤等疾病的前提和基礎,。前列腺主要特征如下：①前列腺結(jié)構(gòu)和功能活動均受雄性激素的調(diào)控,；②基底細胞主要表達高分子量細胞角蛋白(CK-5、CK-14),，基底上皮細胞可分化成管腔上皮細胞,；③前列腺上皮細胞的培養(yǎng)為研究前列腺的許多重要特性以及化學和激素性致癌作用提供了機會。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
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原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈上皮細胞樣,，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
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