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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1980 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 臍帶組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠牙周膜干細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1980 |
組織來源 | 臍帶組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳5代左右 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
小鼠牙周膜干細(xì)胞分離自牙齒組織,；牙周組織是由牙周膜、牙槽骨和牙齦三部分組成,，它的主要功能是支持,、固定和營養(yǎng)牙齒。牙周膜它是一種致密的纖維組織,，一端埋入牙骨質(zhì),，一端連接牙槽骨,，實(shí)際上是牙齒通過牙周膜被懸吊在牙槽窩中,，使牙齒能牢固地固定在頜骨的牙槽窩內(nèi)，具有一定的彈性,，有利于緩沖牙齒承受的咀嚼力,。牙髓的神經(jīng)、血管通過根尖孔與牙槽骨和牙周膜的血管,、神經(jīng)相連接,。營養(yǎng)物質(zhì)通過血液供給牙髓，營養(yǎng)牙齒,，所以牙齒和牙周組織關(guān)系密切。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,，MSCs）來源于胚胎時(shí)期的中胚層組織,，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能，具有向脂肪細(xì)胞,、成骨細(xì)胞,、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景,，目前已能夠從骨髓,、脂肪、滑膜,、骨骼、肌肉等組織以及羊水,、臍帶,、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞。目前,，牙周支持組織重建主要依賴機(jī)械,、藥物或引導(dǎo)組織再生技術(shù)，隨著分子生物學(xué),、組織工程學(xué)和干細(xì)胞技術(shù)的飛速發(fā)展,，牙周組織再生工程技術(shù)成為牙周病治療研究的熱點(diǎn)，牙周膜干細(xì)胞(Periodontal ligament stem cell,，PDLSC）是牙周組織再生工程的關(guān)鍵種子細(xì)胞之一,。因此，關(guān)于牙周膜干細(xì)胞的研究逐漸成為熱點(diǎn),。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人胃癌細(xì)胞（未分化）
人食管鱗癌細(xì)胞
小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞
人胰腺腺泡上皮癌
人乳頭狀卵巢腺癌細(xì)胞
人皮膚鱗癌細(xì)胞
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞
人膽管上皮癌細(xì)胞
人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞
人慢性髓系白血病細(xì)胞
人永生化肝細(xì)胞
人口腔黏膜癌前病變細(xì)胞
人類B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
人永生化子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞
麻疹病毒（MV）核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
貓傳染性腹膜炎（FIP)核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
東西部馬腦脊髓炎病毒（VV）核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
委內(nèi)瑞拉馬腦脊髓炎病毒（VEEV）核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
牛冠狀病毒（BCV）核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒（CAEV）核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
非洲馬瘟（AHSV）核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
鴨坦布蘇病毒（DTMUV）核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
施馬倫貝格病毒（SBV）核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
對(duì)蝦白斑病毒(WSSV)核檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
小鼠牙周膜干細(xì)胞傳染性對(duì)蝦皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)核檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
壞死性肝胰腺炎細(xì)菌(NHPB)核檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒(MBV)核檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
無乳鏈球菌(StA)核檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
停乳鏈球菌(StD)核檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
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