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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1807 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 小腸組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1807 |
組織來源 | 小腸組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞簡介 |
小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞分離自小腸組織；小腸位于腹中,，上端接幽門與胃相通,，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場所,。小腸盤曲于腹腔內(nèi),，上連胃幽門，下接盲腸,，分為十二指腸,、空腸和回腸三部分,。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的,，因?yàn)槭澄锝?jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動的機(jī)械性消化后,，基本上完成了消化過程,，同時(shí)營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜,、粘膜下層,、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞,，粘膜有許多絨毛,，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺,，其開口位于絨毛根部之間,。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞,、杯狀細(xì)胞,、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似,，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似,，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化,、吸收和分泌及運(yùn)動功能,，其中以吸收和分泌功能為主。小腸腔面的環(huán)行皺襞從幽門附近開始出現(xiàn),，在十二指腸末段和空腸頭段極發(fā)達(dá),，向下逐漸減少和變矮，至腸中段以下基本消失,。粘膜表面還有許多細(xì)小的腸絨毛,，是由上皮和固有層向腸腔突起而成，形狀不一,，以十二指腸和空腸頭段發(fā)達(dá),。絨毛于十二指腸呈葉狀，于空腸呈指狀,，于回腸則細(xì)而短,。環(huán)行皺襞和絨毛使小腸表面積擴(kuò)大20-30倍，絨毛根部的上皮下隱至固有層形成管狀的小腸腺,，又稱腸隱窩,，故小腸腺與絨毛的上皮是連續(xù)的，小腸腺直接開口于腸腔,。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5A,；Vero-HCV-NS5A
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4B,；Vero-HCV-NS4B
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4A；Vero-HCV-NS4A
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS3,；Vero-HCV-NS3
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2,；Vero-HCV-NS2
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-E2,；Vero-HCV-E2
獼猴肺細(xì)胞,；MML2
獼猴皮膚細(xì)胞；MMS7
獼猴皮膚細(xì)胞,；MMS4
獼猴肌肉細(xì)胞；MMm7
恒河猴皮膚細(xì)胞,；RM-S1
恒河猴腎細(xì)胞,；RM-3
恒河猴腎細(xì)胞；RM-2
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞,；COS-1
錦鯉皰疹病毒（KHV）核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
鯉春病毒血癥病毒（SVCV）RNA核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
草魚出血病I型病毒（GCRV I）RNA核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
草魚出血病III型病毒（GCRV III）RNA核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
刺激隱核蟲核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
鯉皰疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
病毒性神經(jīng)壞死病毒（VNNV）RNA核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
羅湖病毒（TiLV）RNA核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
草魚出血病II型病毒（GCRV II）RNA核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
對蝦血細(xì)胞虹彩病毒（ SHIV）核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞鰤魚諾卡氏菌核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
惡臭假單胞菌核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
斑點(diǎn)叉尾鮰病毒（CCV）核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
熒光假單胞菌核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
鯉浮腫病毒(CEV)核檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
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