小鼠小腸成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：貓腦星形膠質(zhì)細(xì)胞Aeromonas hydrophila subsp. Hydrophila嗜水氣單胞菌嗜水亞種犬腎細(xì)胞系Cellulomonas flavigena產(chǎn)黃纖維單胞菌猴孤雌單倍體胚胎干細(xì)胞Streptococcus pernyi柞蠶鏈球菌非洲爪蟾腎細(xì)胞Xanthomonas badrii巴氏黃單胞菌

一、細(xì)胞基本屬性：

 

包被條件： 

培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

原代細(xì)胞使用方法：

是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭狀細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。

客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大額牛皮膚細(xì)胞；BFR-S3

大額牛肺細(xì)胞,；BFR-L1
大額牛腎細(xì)胞,；BFR-K1
牛腎細(xì)胞；MDBK
新生牛睪丸支持細(xì)胞系,；NBS
牛trim5α基因沉默細(xì)胞株,；BTL2013
牛甲狀腺細(xì)胞系；hTERT-BTY
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞,；WB-S5
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞,；WB-S4
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞,；WB-S3
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S2
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞,；WB-S1
大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞,；BOS-6
大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞；BOS-5
婆羅門牛皮膚成纖維樣細(xì)胞,；BOS-4
雞源性核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
鴨源性核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法SB標(biāo)準(zhǔn)）
鵝源性核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
馬,、驢源性核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
狐貍源性核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
真核生物18S核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
鴨源性核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
馬源性成分核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
驢源性成分核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
蝦源性成分核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
小鼠小腸成纖維細(xì)胞魚源性成分核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
狗源性成分核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
水貂源性成分核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
貓?jiān)葱猿煞趾藱z測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法
水牛源性成分核檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）