小鼠主動脈瓣膜間質(zhì)細胞的相關產(chǎn)品：人多發(fā)性骨髓瘤細胞Alteromonas macleodii麥氏交替單胞菌人淋巴母細胞Amphibacillus jilinensis吉林兼性芽孢桿菌人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤Amphritea atlantica大西洋美女神菌人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞Arenibacter nanhaiticus南海棲砂桿菌

一,、細胞基本屬性：

 

包被條件： 

培養(yǎng)基：原代間質(zhì)細胞培養(yǎng)體系

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈長梭形細胞，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人非小細胞肺癌細胞

人腎透明細胞腺癌
小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細胞（VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達）
人結腸腺癌細胞
C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞
人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞
人胰腺癌細胞系
大鼠甲狀腺細胞
彌漫大B細胞淋巴瘤細胞
人黑色瘤細胞
人口腔鱗癌細胞
人胰腺星狀細胞
人陰道上皮細胞
人鼻咽癌細胞
人宮頸永生化鱗狀細胞
新疆出血熱病毒(XHFV)核檢測試劑盒(熒光PCR法)
寨卡（zika）病毒核檢測試劑盒（熒光PCR法）
黃熱病毒（YFV）核檢測試劑盒（熒光PCR法）
布尼亞病毒（BV）核檢測試劑盒（熒光PCR法）
登革熱病毒4型(DFV-IV)核檢測試劑盒(熒光PCR法)
登革熱病毒1型(DFV-I)核檢測試劑盒(熒光PCR法)
漢坦病毒2型（HTV-2）核檢測試劑盒(熒光PCR法)
漢坦病毒1型（HTV-1）核檢測試劑盒(熒光PCR法)
漢坦病毒通用型（HTV-U）核檢測試劑盒(熒光PCR法)
諾如病毒（NV）核檢測試劑盒(熒光PCR法)
小鼠主動脈瓣膜間質(zhì)細胞呼吸道合胞病毒通用型（RSV-U）核檢測試劑盒(熒光PCR法)
呼吸道合胞病毒通用型（RSV-U）/人內(nèi)參核檢測試劑盒(雙重熒光PCR法)
呼吸道合胞病毒通用型（RSV-U）/人內(nèi)參（標曲）核檢測試劑盒(雙重熒光PCR法)
豬源性成分(Porcine)核檢測試劑盒(熒光PCR法)
牛源性成分(Bovine)核檢測試劑盒(熒光PCR法)