大鼠結膜成纖維細胞的相關產(chǎn)品：人白血病耐藥株Phenylobacterium haematophilum嗜血苯基桿菌急性早幼粒細胞株Phenylobacterium koreense韓國苯基桿菌人成骨細胞Photobacterium frigidiphilum嗜冷發(fā)光桿菌結腸癌細胞株Photobacterium indicum印度發(fā)光桿菌

一、細胞基本屬性：

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠雜交瘤細胞株；FQ-4F12

小鼠雜交瘤細胞株,；4G1A6B4
小鼠雜交瘤細胞株,；PBP2α-4B8-G7-H7
小鼠雜交瘤細胞株；12B2
小鼠雜交瘤細胞株,；C5-11
小鼠雜交瘤細胞株,；6C7E6
小鼠雜交瘤細胞株；4G7A9
小鼠雜交瘤細胞株,；5D2F2
小鼠雜交瘤細胞株,；JF-IgD
小鼠雜交瘤細胞株；Sm-IgM
小鼠雜交瘤細胞株,；LB_001
小鼠雜交瘤細胞株,；3D5
小鼠雜交瘤細胞株,；VP13-6G
小鼠雜交瘤細胞株,；VP13-3C11
小鼠雜交瘤細胞株,；HBsAg-5H2
綿羊鞭蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
陰道毛滴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
馬毛癬菌探針法熒光定量PCR試劑盒
蛇形毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
安氏毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
通用探針法熒光定量PCR試劑盒
腸道病毒70型和柯薩奇病毒A24型PCR檢測試劑盒（熒光PCR法）
透明毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
豬鞭蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
中華鱉球狀病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
大鼠結膜成纖維細胞錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
馬媾疫錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
伊氏錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

猿猴錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
錐蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣,，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。