大鼠舌表皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠肝上皮細(xì)胞Psychrobacter vallis溪谷嗜冷桿菌小鼠腎小球足細(xì)胞Pusillimonas harenae沙極小單胞菌小鼠淋巴結(jié)上皮細(xì)胞Pusillimonas noertemannii羅氏極小單胞菌大鼠肝星形細(xì)胞Pusillimonas soli土壤極小單胞菌

一,、細(xì)胞基本屬性：

 

原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

原代細(xì)胞使用方法：

是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈內(nèi)皮細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤細(xì)胞株；3D8

雜交瘤細(xì)胞株,；6D7
抗H9亞型病毒HA蛋白小鼠雜交瘤細(xì)胞株,；S1B1
小鼠骨髓雜交瘤細(xì)胞；6E11
小鼠骨髓雜交瘤細(xì)胞,；1G5
雜交瘤細(xì)胞株,；1C1
雜交瘤細(xì)胞株；4C9
雜交瘤細(xì)胞株,；WLC001
雜交瘤細(xì)胞株,；F9-M-01
雜交瘤細(xì)胞株,；F8-M-01
雜交瘤細(xì)胞株；F7-P-01
雜交瘤細(xì)胞株,；α-antitrypsin-P-01
小鼠肺細(xì)胞,；MML1
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-L1
雜交瘤細(xì)胞株,；WV-Vi-01
蛙屬虹彩病毒(RIV)PCR檢測方法(熒光-PCR法)
豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)
貓杯狀病毒（FCV）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法）
豬鏈球菌通用型(SS-U)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)
豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)
鼻疽伯克霍爾德菌(BM)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)
乙型肝炎病毒cccDNA PCR試劑盒
羊源性成分PCR試劑盒
豬藍(lán)耳病毒天津株（TJM-F92）疫苗PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法）
貓皰疹病毒（FHV)PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法）
大鼠舌表皮細(xì)胞牛棒桿菌PCR試劑盒
犬細(xì)小病毒(CPV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)
鸚鵡熱衣原體（CP）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法）
羅湖病毒（TiLV）PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)
牛細(xì)小病毒（BPV）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法）