小鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞Pichia kluyveri var. kluyveri克魯維畢赤酵母克魯維變種人淋巴內(nèi)皮細胞Candida utilis產(chǎn)阮假絲酵母人皮膚T淋巴細胞瘤細胞Zygosaccharomyces bailii拜耳結(jié)合酵母人骨髓基質(zhì)細胞Pichia galeiformis盔狀畢赤酵母

一,、細胞基本屬性：

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣,，在技術(shù)部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞,；PUMC-mips-D3

小鼠胰腺癌細胞（B類）；Pan02
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）,；Pan02-CAG-tTA-2D1
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）,；Pan02-CAG-tTA-3E6
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）；Pan02-CAG-tTA-4B3
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）,；Pan02-CAG-tTA-4C5
雜交瘤（B類）,；C31D2B2
雜交瘤（B類）；C31D2E11
雜交瘤（B類）,；Z15A2G6A2C7
雜交瘤（B類）,；Z172A4C4C6F3G12
雜交瘤（B類）；Z173B1C8A11E7B8E2
雜交瘤（B類）,；Z23B6B11B1G4F3C11
小鼠抗人kappa雜交瘤細胞,；mAbhIgκ-488
小鼠抗人IgM雜交瘤細胞；mAbhIgM-489
小鼠抗人kappa雜交瘤細胞,；mAbhIgκ-490
豬乳頭瘤病毒PCR檢測試劑盒
豬水泡病病毒PCR檢測試劑盒
塔卡里伯病毒PCR檢測試劑盒
鏈狀帶絳蟲PCR檢測試劑盒
太米阿米病毒PCR檢測試劑盒
塔那痘病毒PCR檢測試劑盒
福賽斯坦納菌PCR檢測試劑盒
跗線螨屬通用PCR檢測試劑盒
馬生殖泰勒氏菌PCR檢測試劑盒
嗜麥芽窄食單胞菌PCR檢測試劑盒
小鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞犬鏈球菌PCR檢測試劑盒
停乳鏈球菌PCR檢測試劑盒
馬鏈球菌馬亞種PCR檢測試劑盒
海豚鏈球菌PCR檢測試劑盒
口腔鏈球菌PCR檢測試劑盒