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具體步驟：

1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織,，無菌PBS清洗3-5次,；切成約1mm3組織塊；

2. 加入2mmol 的 EDTA,，搖勻后放置冰上約 30-60min,；

3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）,；

4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱,。每15min搖晃一次,，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h,；

5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集,；

6. 用培養(yǎng)基重懸,，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng),。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通。

原代細胞培養(yǎng)：

原代細胞（Primary cells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養(yǎng)的細胞,。這里的組織主要指：組織器官,、外周血及胚胎等。

原代細胞培養(yǎng)：由于原代細胞生長緩慢,，繁殖一定的代數(shù)停止生長（一般10代以內）,。所以一般認為：培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。

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