人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人膀胱癌細(xì)胞，T24細(xì)胞淡紫色擬青霉Paecilomyces lilacinus人膀胱上皮永生化細(xì)胞,，SV-HUC-1細(xì)胞島青霉Penicillium islandicum Sopp人膀胱移行細(xì)胞癌,，BC-3C細(xì)胞稻黑孢霉Nigrospora oryzae人膀胱移行細(xì)胞癌，J82細(xì)胞稻平臍蠕孢Cochliobolus miyabeanus (S. Ito & Ku

一,、細(xì)胞基本屬性：

 

原代細(xì)胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

原代細(xì)胞使用方法：

是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈內(nèi)皮細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗,。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進(jìn)行包被,，以增強細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,；RKO-E6

人肝癌亞力山大細(xì)胞,；PLC/PRF/5
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H661
人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞,；NCI-H292
人甲狀腺鱗癌細(xì)胞,；SW579 [SW 579；SW-579]
人骨肉瘤細(xì)胞,；SW 1353
人胃癌細(xì)胞,；NCI-N87 [N87]
人急性非B非T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞；Reh
人咽鱗癌細(xì)胞,；FaDu
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞,；HCT-15 [HCT15]
人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞；DLD-1
人腎透明細(xì)胞癌,；Caki-1
人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤,；U-87 MG [U87MG；U87 MG]
人紅系白血病細(xì)胞,；TF-1
人Burkkit淋巴瘤細(xì)胞,；Daudi
禽白血病病毒A亞群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
禽白血病病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
小孢子酒曲菌染料法熒光定量PCR試劑盒
神經(jīng)肉孢子蟲染料法熒光定量PCR試劑盒
肉孢子蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒
地衣形芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
枯草芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
幼蟲芽胞桿菌（美洲蜂幼蟲腐臭病）染料法熒光定量PCR試劑盒
樣芽胞桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞蠟狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
炭疽芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
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溫和氣單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒
滅鮭氣單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒