人子宮內(nèi)膜異位癥間質(zhì)細胞的相關(guān)產(chǎn)品：人肺鱗癌細胞,，NCI-H520細胞都柏林沙門氏菌Salmonella dublin人肺鱗癌細胞，NCI-H1703細胞杜氏炭疽病菌Colletotrichum dematium (Persoon : Fries) Grove人肺鱗癌細胞,，SK-MES-1細胞短柄帚霉Scopulariopsis breuicaulis人肺腺癌細胞,，Calu-3細胞短刺小克銀漢霉C

一、細胞基本屬性：

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人卵巢腺癌細胞,；SW626 [SW 626,；SW-626]

人子宮內(nèi)膜腺癌細胞；RL95-2
人子宮內(nèi)膜腺癌細胞,；KLE
人卵巢腺癌細胞,；OVCAR-3
人結(jié)直腸腺癌細胞；LS 174T [LS174T]
人肝腹水腺癌細胞,；SK-HEP-1
人結(jié)直腸腺癌細胞,；Caco-2
人小細胞肺癌細胞；DMS 153 [DMS153]
人前列腺癌細胞,；LNCaP1
人前列腺癌細胞,；LNCaP2
人黑色瘤細胞系；A375[A-375]
人肝癌細胞,；HCCLM3
人橫紋肌肉瘤細胞,；RD
人急性淋巴白血病細胞；Kasumi-1
人結(jié)腸腺癌細胞,；SW48
液化菌染料法熒光定量PCR試劑盒
菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒
馬傳染性貧血病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
麻疹病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
糞產(chǎn)堿桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
惡臭假單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒
熒光假單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒
鼻疽假單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒
綠膿假單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒
假單胞菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒
人子宮內(nèi)膜異位癥間質(zhì)細胞伊蒙微小菌染料法熒光定量PCR試劑盒
卡奇谷病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
輪狀病毒E群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
輪狀病毒D群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
輪狀病毒C群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒