兔乳腺導管上皮細胞的相關產(chǎn)品：人外周血嗜堿性白血病細胞,，KU812細胞海洋嗜殺酵母Wickerhamomyces anomalus人微血管內皮細胞株，HMEC-1細胞海源菌Idiomarina sp.人胃癌細胞,，AZ-521細胞海云臺副球菌Paracoccus haeundaensis人胃癌細胞,，HGC-27細胞海棗曲霉Aspergillus phoenicis

一、細胞基本屬性：

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。

五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠雜交瘤細胞,；FZ201

小鼠雜交瘤細胞,；HB Hepama-1(HP-1)
小鼠雜交瘤細胞；HB Hepama-18(HP-18)
抗人VEGF鼠源單克隆抗體雜交瘤細胞,；VEGF-MmAb-C14C5
小鼠雜交瘤細胞系,；MAPR-S2
小鼠雜交瘤細胞；MAER-S1
小鼠骨髓瘤細胞,；MKM150－2
小鼠成纖維細胞包裝細胞,；pA317(pLCDSN)
小鼠成纖維細胞包裝細胞；pA317 C1
小鼠骨髓瘤細胞系； Lys30-51VH/Hu
小鼠雜交瘤細胞,；HB Hepama-1
小鼠B淋巴細胞系,；RMS-S-B 51
小鼠雜交瘤細胞；ZUC3
小鼠雜交瘤細胞,；ZUB4
小鼠雜交瘤細胞,；ZUB1
石斛探針法PCR鑒定試劑盒
柿蒂探針法PCR鑒定試劑盒
石菖蒲探針法PCR鑒定試劑盒
升麻探針法PCR鑒定試劑盒
生姜探針法PCR鑒定試劑盒
伸筋草探針法PCR鑒定試劑盒
麝香探針法PCR鑒定試劑盒
蛇床子探針法PCR鑒定試劑盒
山茱萸探針法PCR鑒定試劑盒
山楂探針法PCR鑒定試劑盒
兔乳腺導管上皮細胞山藥探針法PCR鑒定試劑盒
山豆根探針法PCR鑒定試劑盒
山慈菇探針法PCR鑒定試劑盒

沙苑子探針法PCR鑒定試劑盒
桑枝探針法PCR鑒定試劑盒

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內皮細胞樣,，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內,；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。