兔牙齦成纖維細胞的相關(guān)產(chǎn)品：幼倉鼠腎細胞,，BHK-21細胞假格里尼翁布魯氏菌Brucella pseudogrignonensis正常小鼠睪丸Sertoli細胞,，TM4細胞假黃單胞菌屬Pseudoxanthomonas sp.中國倉鼠肺細胞，CHL細胞假堅強芽孢桿菌Bacillus pseudofirmus中國倉鼠卵巢細胞k1 亞克隆系,，CHO-K1細胞假交替單胞菌Pseudoalteromona

一,、細胞基本屬性：

 

原代細胞實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤細胞株,；23-1

雜交瘤細胞株；18-1
雜交瘤細胞株,；27-1
雜交瘤細胞株,；T-Ⅱ
雜交瘤細胞株；COC1501
雜交瘤細胞株,；PCP13
雜交瘤細胞株,；LT005
雜交瘤細胞株；LT004
雜交瘤細胞株,；SC20150701D
雜交瘤細胞株,；SC20150701A
雜交瘤細胞株；2G9A3-35H11
雜交瘤細胞株,；5H1E9E8D7H12
雜交瘤細胞株,；CD98-3H3
雜交瘤細胞株；CD98-2D3
雜交瘤細胞株,；CD98-2C8
塔那痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
塔卡里伯病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
松鼠猴皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
禽腎炎病毒2型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
禽腎炎病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
禽腎炎病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
侵入性絲囊霉菌（潰瘍綜合癥病原）探針法熒光定量PCR試劑盒
水牛正痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
鼠痘(脫腳病)病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
嗜人錐蠅探針法熒光定量PCR試劑盒
兔牙齦成纖維細胞嗜麥芽窄食單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒
十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
施馬倫貝格病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
圣路易斯腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
腎綜合癥出血熱病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒