兔腎近端小管上皮細胞的相關產品：人永生化表皮細胞，HaCat細胞紅平紅球菌Rhodococcus erythropolis人永生化肝細胞,，C3A細胞紅色青霉Penicillium rubrum人尤文氏肉瘤細胞,，TC-32細胞紅色糖多孢菌Saccharopolyspora erythraea人早幼粒白血病細胞，HL60細胞紅色熒光大腸桿菌Escherichia coli

一,、細胞基本屬性：

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。

五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈內皮細胞樣，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產品：
雜交瘤細胞,；18A4

雜交瘤細胞；A375sci
雜交瘤細胞,；hT279
雜交瘤細胞,；hTSC29
雜交瘤細胞；H1H8
雜交瘤細胞,；H2H5
雜交瘤細胞,；Z1A5
雜交瘤細胞；AMVP
雜交瘤細胞,；CS-H
雜交瘤細胞,；ACV1
雜交瘤細胞；HTK
雜交瘤細胞,；A8
雜交瘤細胞,；S-163-6
小鼠雜交瘤細胞；AFB2008G4
小鼠雜交瘤細胞,；AFB20084F3
訶子探針法PCR鑒定試劑盒
荷葉探針法PCR鑒定試劑盒
核桃仁探針法PCR鑒定試劑盒
何首烏探針法PCR鑒定試劑盒
合歡皮探針法PCR鑒定試劑盒
合歡花探針法PCR鑒定試劑盒
藁本探針法PCR鑒定試劑盒
海藻探針法PCR鑒定試劑盒
海螵蛸探針法PCR鑒定試劑盒
海金沙探針法PCR鑒定試劑盒
兔腎近端小管上皮細胞桂枝探針法PCR鑒定試劑盒
廣藿香探針法PCR鑒定試劑盒
廣防己探針法PCR鑒定試劑盒
瓜蔞子探針法PCR鑒定試劑盒
瓜蔞皮探針法PCR鑒定試劑盒