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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1703 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 脊髓組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 神經(jīng)元細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1703 |
組織來源 | 脊髓組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 神經(jīng)元細(xì)胞樣 |
包被條件： PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基：含B-27 Supplement,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：不傳代
消化液：0.125%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞簡介 |
大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞分離自脊髓組織；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu),，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù),；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息,。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息,。人和脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面,，上端連接延髓,，兩旁發(fā)出成對(duì)的神經(jīng)，分布到四肢,、體壁和內(nèi)臟,。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成,；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞,。脊髓兩旁發(fā)出許多成對(duì)的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚,、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,，也是許多簡單反射活動(dòng)的低級(jí)中樞,。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié)，31對(duì)脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的,。神經(jīng)系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元,，即神經(jīng)細(xì)胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大,。但都具有胞體和樹突,、軸突。胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲,、微管,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個(gè)有明顯核仁的核,。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,，在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀，稱為尼氏小體,。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起,，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動(dòng)，突起的大小和形態(tài)各不相同,，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別,。脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元含量少,，分離純化難度大,，且脊髓神經(jīng)元細(xì)胞是高度分化的終末細(xì)胞，不能分裂增殖,，培養(yǎng)要求高,。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形，體積小,，透亮,，無突起。培養(yǎng)2-3d,，可見胞體增大,，突起增多延長；培養(yǎng)6-7d,，細(xì)胞體大飽滿,，突起明顯增加延長并交織成網(wǎng)，光暈明顯,，立體感強(qiáng),。培養(yǎng)20d后，死亡細(xì)胞明顯增加,，細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)空泡,，突起粗細(xì)不均，甚至脫壁,，發(fā)生細(xì)胞崩解,。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈神經(jīng)元細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人NK細(xì)胞
小鼠頸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
兔小腸成纖維細(xì)胞
大鼠瘢痕成纖維細(xì)胞
小鼠卵巢內(nèi)膜細(xì)胞
兔纖維環(huán)細(xì)胞
小鼠紋狀體神經(jīng)元細(xì)胞
人附睪成纖維細(xì)胞
大鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞
豬垂體細(xì)胞
兔毛囊角質(zhì)細(xì)胞
人直腸上皮細(xì)胞
兔脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞
兔冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
兔支氣管平滑肌細(xì)胞
運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢菌IymononasmobilisKluyverKluyverandVanNiel
大豆根瘤菌Bradyrhizobiumjaponicum(Kirchner)Jordan
側(cè)耳Pleurotussp.
黃萎輪枝孢Verticilliumalbo-atrumReinkeetBerthold
綠色木霉TrichodermaviridePersoon:Fries
粉紅木霉TrichodermaroseumHeffm
擬康氏木霉TrichodermapseadokoningiRifi
木素木霉Trichodermalignorum(Tode)Harz
康寧木霉TrichodermakoningiiOudem
雅致枝霉ThaminidiumelegansLinkexGary
大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞綠穗霉Spicariapresina(Maublanc)Sawada
根霉屬的種Rhizonussp.
三寶壟根霉RhizopussemaranzensisTakeda
點(diǎn)頭根霉RhizopusreflexusBainier
黑菇,、煙色紅菇Russulaadusta(Pers.)Fr.
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