大鼠破骨細胞的相關(guān)產(chǎn)品：人髓母細胞瘤組織源細胞桉樹泛菌Pantoeaeucalypti人胎盤間充質(zhì)干細胞金雀兒根瘤蒼白桿菌Ochrobactrumcytisi人胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞阿拉斯加鞘氨醇盒菌Sphingopyxisalaskensis人退行性椎間盤髓核細胞皮爾瑞俄類芽胞桿菌Paenibacilluspeoriae

一,、細胞基本屬性：

 

包被條件： 

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：不傳代

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

原代細胞實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈多核,、巨細胞，在技術(shù)部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人真皮淋巴上皮細胞

人表皮角化細胞
人表皮黑色素細胞
小鼠雪旺氏細胞
大鼠雪旺氏細胞
人脂肪細胞
人腦動脈血管內(nèi)皮細胞
人腦動脈血管平滑肌細胞
人腦靜脈血管平滑肌細胞
人皮層神經(jīng)元細胞
人神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞
大鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞
人神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞
人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞
小鼠脈絡膜血管內(nèi)皮細胞
海洋鹽單胞菌Cobetiamarina=HalomonASmarina
長赤細菌Erythrobacterlongus
發(fā)酵纖維單胞菌Actinotaleafermentans=Cellulomonasfermentans
CellulomonascarbonisCellulomonascarbonis
GalbibactermesophilusGalbibactermesophilus
棒狀桿菌（黃色短桿菌）Corynebacteriumglutamicum（Brevibacteriumflavum）
SphingobiumamienseSphingobiumamiense
SphingomonasfennicaSphingomonasfennica
嗜肺軍團菌Legionellapneumophilasubsp.pneumophila
類干酪乳? ..Lactobacillusparacaseisubsp.paracasei
大鼠破骨細胞MethylophagamurataMethylophagamurata
HyphomonasjohnsoniiHyphomonasjohnsonii
HyphomonasrosenbergiiHyphomonasrosenbergii
Halobacillussp.Halobacillussp.
盲腸腸球菌Enterococcuscecorum