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詳細介紹
原代細胞培養(yǎng)：
原代細胞（Primary cells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養(yǎng)的細胞,。這里的組織主要指：組織器官,、外周血及胚胎等。
原代細胞培養(yǎng)：由于原代細胞生長緩慢,，繁殖一定的代數(shù)停止生長（一般10代以內）,。所以一般認為：培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。
公司產品僅供科研研究實驗
一,、細胞基本屬性 | |
細胞名稱 | 大鼠膀胱平滑肌細胞 |
組織來源 | 膀胱組織 |
商品貨號 | A01X1594 |
種屬來源 | 大鼠 |
產品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
細胞簡介 | 大鼠膀胱平滑肌細胞分離自膀胱組織,；膀胱是主要由平滑肌細胞組成的中空器官，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲存和排出尿液,。膀胱平滑肌細胞表型的調控和可誘導一氧化合酶的表達與多種病理狀況有關,，包括膀胱功能障礙。研究表明,，組織缺氧抑制膀胱平滑肌細胞的增殖,，膀胱平滑肌細胞的分化依賴于膀胱上皮細胞釋放的因子。膀胱平滑肌細胞外基質的分泌表型可通過細胞所經歷的機械變形頻率而改變,。平滑肌是許多疾病中的共同路徑,，因此，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過程中平滑肌怎樣變化,，這是治療方法取得進展的重要一步,。膀胱壁由三層組織組成，由內向外為粘膜層,，肌層和外膜,。逼尿肌為膀胱壁層肌肉的總稱，由平滑肌構成,。分為三層,，內、外層為縱行肌,，中層為環(huán)形肌,。環(huán)狀肌厚,，堅強有力。逼尿肌收縮,，可使膀胱內壓升高,，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌,，形成尿道內括約肌,。在括約肌收縮能關閉尿道內口，防止尿液自膀胱漏出,。膀胱平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細胞不僅為組織工程膀胱,、尿道提供種植細胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基礎與前提,。 |
包被條件 | |
培養(yǎng)基 | 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
生長特性 | 貼壁 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
傳代特性 | 可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)最佳 |
消化液 | 0.25%胰蛋bai酶 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
具體步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次,；切成約1mm3組織塊,；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min,；
3. 離心,，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間,，置于37°培養(yǎng)箱,。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,，約1-2h,；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,，收集,；
6. 用培養(yǎng)基重懸,，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng),。
注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通,。
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