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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1701 | 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 組織來源 | 腦子組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 不規(guī)則細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 大鼠腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1701 |
組織來源 | 腦子組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 不規(guī)則細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ,，95%； CO2 ,， 5%
細(xì)胞簡介 |
神經(jīng)元 ,，又稱神經(jīng)細(xì)胞 ，是構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位,。 神經(jīng)元是具有長突觸 (軸突) 的細(xì)胞 ,，它由細(xì)胞體和細(xì)胞突起構(gòu)成。在長的軸突 上套有一層鞘 ,，組成神經(jīng)纖維 ,，它的末端的細(xì)小分支叫做神經(jīng)末梢。細(xì)胞體位于 腦,、脊髓和神經(jīng)節(jié)中 ,，細(xì)胞突起可延伸至全身各器官和組織中。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈不規(guī)則細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔食管上皮細(xì)胞
大鼠膀胱上皮細(xì)胞
大鼠腦血管周細(xì)胞
兔星形膠質(zhì)細(xì)胞
小鼠鼓膜上皮細(xì)胞
兔子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞
大鼠原代舌表皮細(xì)胞
大鼠原代小腸成纖維細(xì)胞
大鼠原代骨髓巨噬細(xì)胞
小鼠口腔黏膜上皮細(xì)胞
兔冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
大鼠主動(dòng)脈弓內(nèi)皮細(xì)胞
人外周血樹突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)
兔甲狀腺成纖維細(xì)胞
小鼠皮膚成纖維細(xì)胞
短短芽孢桿菌Brevibacillusbrevis
蠟狀芽孢桿菌Bacilluscereus
放射型根瘤菌Rhizobiumradiobacter
抗輻射不動(dòng)桿菌Acinetobacterradioresistens
無乳鏈球菌Streptococcusagalactia
金黃萄球菌亞種黃球菌Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosenbach
短乳桿菌Lactobacillusbrevis
腸膜明串珠菌Leuconostocmesenteroides
哈維氏弧菌Vibrioharvey
熒光假單胞菌Pseudomonasfluorescens
大鼠腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)酸克雷伯氏菌Klebsiellaoxytoc
枯草芽孢桿菌BacillusSubtilis(Ehrenberg)Cohn
檸檬泛菌Pantoeacitrea
鼠傷門氏菌Salmonellaentericasubsp
短小芽孢桿菌Bacilluspumilu
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