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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1561 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 小腸組織 | 種屬來(lái)源 | 大鼠 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 大鼠小腸平滑肌細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1561 |
組織來(lái)源 | 小腸組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來(lái)源 | 大鼠 | 傳代特性 | 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
大鼠小腸平滑肌細(xì)胞分離自小腸組織；小腸位于腹中,，上端接幽門與胃相通,，下端通過(guò)闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場(chǎng)所,。小腸盤曲于腹腔內(nèi),，上連胃幽門，下接盲腸,，分為十二指腸,、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的,，因?yàn)槭澄锝?jīng)過(guò)小腸內(nèi)胰液,、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動(dòng)的機(jī)械性消化后，基本上完成了消化過(guò)程,，同時(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了,。小腸管壁由粘膜、粘膜下層,、肌層和漿膜構(gòu)成,。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛,，絨毛根部的上皮下陷至固有層,，形成管狀的腸腺，其開(kāi)口位于絨毛根部之間,。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切,；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞、杯狀細(xì)胞,、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞,。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似,，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短,，不形成紋狀緣,。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運(yùn)動(dòng)功能,，其中以吸收和分泌功能為主,。平滑肌細(xì)胞的收縮是負(fù)責(zé)腸蠕動(dòng)的動(dòng)力，促使食物向下運(yùn)動(dòng),。小腸平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。小腸平滑肌肉瘤是起源于小腸壁肌層,、黏膜下肌層和腸壁血管平滑肌的惡性腫瘤，是小腸結(jié)締組織惡性腫瘤中常見(jiàn)的一種,。因此,，體外小腸平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)對(duì)研究小腸平滑肌肉瘤提供了基礎(chǔ)和前提。此外,，體外培養(yǎng)細(xì)胞,，由于影響因素較為單一，是研究細(xì)胞功能以及相應(yīng)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的基礎(chǔ),。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系Phoenix-ECO (STR鑒定正確)
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Pseudomonas stutzeri施氏假單胞菌
Pseudomonas syringae丁香假單胞菌
Pseudomonas synxantha類黃假單胞菌
Pseudomonas taetrolens腐臭假單胞菌
Pseudomonas tolaasii托拉斯假單胞菌
Pseudomonas tremae山黃麻假單胞菌
Pseudomonas veronii斡氏假單胞菌
Pseudomonas umsongensis陰城假單胞菌
Pseudomonas viridiflava淺綠黃假單胞菌
Staphylococcus aureus subsp. aureus色葡萄球菌
大鼠小腸平滑肌細(xì)胞Staphylococcus aureus subsp. aureus色葡萄球菌金黃亞種
Staphylococcus epidermidis表皮葡萄球菌
Staphylococcus equorum馬葡萄球菌
Staphylococcus sp.葡萄球菌
Staphylococcus warneri沃氏葡萄球菌
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
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