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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1558 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 胃組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 大鼠胃平滑肌細胞 | 商品貨號 | A01X1558 |
組織來源 | 胃組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細胞簡介 |
大鼠胃平滑肌細胞分離自胃組織；胃柔軟,，活體呈橘紅色,。胃空虛時形成許多皺襞，充盈時變平坦,。胃壁由粘膜,、粘膜下膜、肌膜和漿膜四層構(gòu)成,。粘膜上皮為柱狀上皮,。上皮向粘膜深部下陷構(gòu)成大量腺體(胃底腺、賁門腺,、幽門腺),，它們的分泌物混合形成胃液，對食物進行化學性消化,。粘膜在幽門處由于覆蓋幽門括約肌的表面而形成環(huán)狀的皺襞叫幽門瓣,。胃肌膜由三層平滑肌構(gòu)成，外層縱形,，中層環(huán)形,，內(nèi)層斜行，其中環(huán)形肌發(fā)達,，在幽門處特別增厚形成幽門括約肌,。胃平滑肌細胞源自胃的平滑肌層，細胞通過緊密連接,，進行同步性運動,，完成肌肉的舒縮活動，以推動食物前進,，完成對食物的機械性消化,，并促進化學性消化和吸收,。胃平滑肌具有肌組織的共同特性，如興奮,、自律性,、傳導(dǎo)性和收縮性，在離體后,，置于適宜的環(huán)境內(nèi),，仍能進行良好的節(jié)律性運動，但其收縮很緩慢,，節(jié)律性遠不如心肌規(guī)則,。胃平滑肌對電刺激較不敏感，但對于牽張,、溫度和化學刺激則特別敏感,，輕微的刺激常可引起強烈的收縮,。胃平滑肌的這一特性是與它所處的生理環(huán)境分不開的,，胃內(nèi)容物對平滑肌的牽張、溫度和化學刺激是引起內(nèi)容物推進或排空的自然刺激因素,。 |
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣,，在技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人膀胱癌細胞BIU-87(STR鑒定正確)
小鼠黑色素瘤帶綠色熒光B16+GFP（種屬鑒定）
人卵巢癌腺癌細胞 NIH:OVCAR-8(STR鑒定正確)
大鼠腦I型星形膠質(zhì)細胞 CTX-TNA2（種屬鑒定）
昆蟲卵巢細胞Sf9（種屬鑒定）
小鼠乳腺癌細胞 E0771（種屬鑒定）
人食管鱗狀細胞癌COLO-680N(STR鑒定正確)
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人乳腺腺癌細胞MDA-MB-415(STR鑒定正確)
人彌漫大B淋巴瘤細胞WSU-DLCL-2(STR鑒定正確)
人鼻腔上皮細胞RPMI 2650 (STR鑒定正確)
大鼠肝細胞BRL（種屬鑒定）
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人神經(jīng)母細胞瘤細胞IMR-32(STR鑒定正確)
中國倉鼠卵巢細胞CHO（種屬鑒定）
Bacillus vedderi威氏芽孢桿菌
Escherichia coli大腸埃希氏菌
Escherichia blattae蟑螂埃希氏菌
Escherichia hermannii赫氏埃希氏菌
Escherichia sp.埃希氏菌
Escherichia vulneris傷口埃希氏菌
Rhizobium galegae山羊豆根瘤菌
Rhizobium gallicum高盧根瘤菌
Rhizobium giardinii吉氏根瘤菌
Rhizobium huautlense華特拉根瘤菌
大鼠胃平滑肌細胞Rhizobium hainanense海南根瘤菌
Rhizobium leguminosarum豌豆根瘤菌
Rhizobium indigoferae木蘭根瘤菌
Rhizobium lupini羽扇豆根瘤菌
Rhizobium mongolense內(nèi)蒙古根瘤菌
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