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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1522 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 支氣管組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 大鼠支氣管上皮細胞 | 商品貨號 | A01X1522 |
組織來源 | 支氣管組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細胞簡介 |
大鼠支氣管上皮細胞分離自支氣管組織,；支氣管(Bronchi)，是指由氣管分出的各級分枝,，由氣管分出的一級支氣管,，即左、右主支氣管,。左主支氣管與右主支氣管相比較,，前者較細長，走向傾斜,；后者較粗短,，走向較前者略直，所以經(jīng)氣管墮入的異物多進入右主支氣管,。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是,，氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是,。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線,，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細胞,，還作為效應細胞合成,、釋放多種炎性介質(zhì)和細胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應,。支氣管上皮細胞在哮喘,、慢性阻塞性肺疾病、肺癌,、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機制中均起著重要的作用,。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性，因此,，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要,。 |
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈上皮細胞樣，在技術(shù)部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人肺癌細胞NCI-H1755(STR鑒定正確)
小鼠肺癌細胞LLC（種屬鑒定）
正常大鼠腎細胞NRK-52E（種屬鑒定）
中國倉鼠肺細胞CHL(種屬鑒定）
人乳腺導管癌細胞MDA-MB-134-VI(STR鑒定正確)
小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞EOMA（種屬鑒定）
人腦髓母細胞瘤細胞D283 Med(STR鑒定正確)
人胰腺癌細胞 1.1B4/PANC-1(STR鑒定正確)
人結(jié)腸癌細胞SW620 (STR鑒定正確)
人胰腺導管癌細胞CFPAC-1(STR鑒定正確)
小鼠肝癌帶熒光素酶 H22+LUC
人乳腺癌細胞JIMT-1(STR鑒定正確)
人乳腺癌細胞SUM159PT(STR鑒定正確)
小鼠腦神經(jīng)瘤細胞帶熒光素酶Neuro-2a+LUC(種屬鑒定)
人甲狀腺癌細胞ARO(STR鑒定正確)
Flectobacillus major大彎桿菌
Ancylobacter vacuolatus液泡屈曲桿菌
Alcanivorax borkumensis泊庫島食烷菌
Arthrobacter uratoxydans尿酸氧化節(jié)桿菌
Lactobacillus pantheris美洲虎乳桿菌
Stenotrophomonas maltophilia嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌
Lactobacillus manihotivorans食木薯乳桿菌
Ralstonia pickettii皮氏羅爾斯通氏菌
Achromobacter xylosoxidans木糖氧化無色桿菌
Ralstonia solanacearum茄科羅爾斯通氏菌
大鼠支氣管上皮細胞Burkholderia cepacia洋蔥伯克霍爾德氏菌
Lactobacillus reuteri路氏乳桿菌
Ralstonia eutropha富養(yǎng)羅爾斯通氏菌
Burkholderia vesicularis泡囊伯克霍爾德氏菌
Burkholderia gladioli唐菖蒲伯克霍爾德氏菌
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