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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1273 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 頸動脈組織 | 種屬來源 | 人 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮樣,，多角形細胞 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 人頸動脈內(nèi)皮細胞 | 商品貨號 | A01X1273 |
組織來源 | 頸動脈組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 細胞特性確定傳代 |
生長特性 | 貼壁培養(yǎng) | 細胞形態(tài) | 上皮樣,，多角形細胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%,；CO2 ,，5%
細胞簡介 |
頸動脈存在于脊椎動物頸部的動脈。有頸外動脈和頸內(nèi)動脈,， 前者分布至頭頂部 和顏面部,， 后者進入顱內(nèi)分布至腦和眼眶內(nèi)。內(nèi)皮細胞層是血液和其它組織的天 然屏障,。內(nèi)皮細胞功能病變是造成動脈粥樣硬化的主要原因,。內(nèi)皮細胞同時會合 成和分泌凝血和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的增強和抑制物,，以及影響血小板粘附和聚集 的媒介物。它們同時也會分泌控制細胞增殖的蛋白來維持血管壁的健康,。內(nèi)皮細 胞會分泌t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及響應TNF-α,，繼而分泌細胞因子GM-CSF ，表達ICAM-1表面抗體,， 產(chǎn)生大量的一氧化和endothelin,。原代動脈內(nèi)皮細 胞的體外培養(yǎng)系統(tǒng)有助于在特定的體外條件下研究血管內(nèi)皮細胞的功能。 |
原代細胞實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁培養(yǎng)細胞,，細胞形態(tài)呈上皮樣,，多角形細胞，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人白血病耐藥株
急性早幼粒細胞株
人成骨細胞
結腸癌細胞株
人卵巢癌紫衫醇耐藥株
人淋巴母細胞,；T2(174×CEM.T2)
人急性淋巴母細胞白血病細胞
人雪旺細胞
人滋養(yǎng)細胞
人正常乳腺上皮細胞
乳腺癌細胞
人臍靜脈融合細胞
血管內(nèi)皮細胞
轉染了microRNA-mock基因的陰性對照細胞
Hela-Ap-1
Phenylobacterium haematophilum嗜血苯基桿菌
Phenylobacterium koreense韓國苯基桿菌
Photobacterium frigidiphilum嗜冷發(fā)光桿菌
Photobacterium indicum印度發(fā)光桿菌
Photobacterium lipolyticum解脂酸發(fā)光桿菌
Phycicoccus bigeumensis飛禽島海草球菌
Phycicoccus cremeus奶油白海草球菌
Phycicoccus dokdonensis獨島海草球菌
Plesiomonas shigelloides類志賀氏臨單胞菌
Polaromonas aquatica水極單胞菌
人頸動脈內(nèi)皮細胞Polaromonas hydrogenivorans食氫極單胞菌
Pontibacillus yanchengensis鹽城海桿菌
Promicromonospora flava微黃原小單胞菌
Polaromonas jejuensis濟州極單胞菌
Propionibacterium acnes瘡皰丙酸桿菌
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