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人elisa試劑盒實驗操作流程
閱讀:84 發(fā)布時間:2016-9-27人ELISA試劑盒雙抗夾心法操作流程:
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,,次日,,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,,下同)。
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,,置37℃孵育1小時,。然后洗滌。(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔),。
3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5~1小時,,洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
5.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。
人ELISA試劑盒檢測未知抗體的間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,
2.次日洗滌3次,;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,;
5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌,;
6.’zui后一遍用DDW洗滌,。
7.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
8.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
9.結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”,、“-”號表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性,。
IFN- Beta (Interferon Beta) human 干擾素-β抗原
PSCA 前列腺干細(xì)胞抗原
Agrin peptide 聚集蛋白抗原
ATP citrate lyase/ACLY 三磷酸腺檸檬酸裂解酶
AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1) 脂肪細(xì)胞增強結(jié)合蛋白1
phospho-AMPK alpha 1(Thr172) peptaide 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1
ADM 1-52/AM 1-52/Adrenomedullin 1-52 腎上腺髓質(zhì)素(1-52)
Amyloid protein precursor 淀粉樣肽前體蛋白(多肽抗原)
ACTH(1-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(1-39)
Adiponectin 脂聯(lián)素(多肽抗原)
Acetyl CoA Carboxylase 乙酰輔酶A羧化酶
Alkaline Phosphatase/ALP/AP 堿性磷酸酶
人ELISA試劑盒