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一,、人ELISA試劑盒的原理
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性。在測定時,，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析,。由于酶的催化效率很高,，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度,。
二,、人ELISA試劑盒的類型
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體,。在這種測定方法中有三個必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體,，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標記的抗原或抗體,，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反應(yīng)的底物,。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型：
1.雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,，操作步驟如下：
1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),，形成固相抗體,。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2）加受檢標本,，保溫反應(yīng),。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物,。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì),。
2.雙抗原夾心法測抗體
反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物,，以檢測相應(yīng)的抗體,。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋,，可直接用于測定,，因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法,。本法關(guān)鍵在于酶標抗原的制備,，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標記方法,。
3.間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的方法,。其原理為利用酶標記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法（見圖2-3）,。操作步驟如下：
1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì),。
2）加稀釋的受檢血清,，保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,，形成固相抗原抗體復(fù)合物,。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體,，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去,。
3）加酶標抗抗體?？捎妹笜丝谷薎g以檢測總抗體,，但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標抗體抗體結(jié)合,，從而間接地標記上酶,。洗滌后，固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關(guān),。人ELISA試劑盒