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人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒
閱讀:136 發(fā)布時間:2013-1-7人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒使用說明書elisa法測定
規(guī)格:48T/96T
本試劑盒僅供體外研究使用!
ELISA法定量測定人尿液或其它相關(guān)生物液體指標(biāo)的含量。
生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制,。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml,。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,,輕輕混勻,,在使用前一小時內(nèi)配制。
人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒操作步驟
實驗開始前,,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,,混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,,用樣品稀釋液進行稀釋,,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。
2. 棄去液體,甩干,,不用洗滌,。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,,在使用前一小時內(nèi)配制),,37℃,60分鐘,。
3. 溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,甩干,,洗板3次,,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,,甩干,。 產(chǎn)品名中文(英文)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,,37℃,60分鐘,。
5. 溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,甩干,,洗板5次,,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,,甩干,。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),,此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,,后3-4孔顯色不明顯,即可終止),。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測,。
本品用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,,往包被抗HVA抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素化的抗HVA抗體、HRP標(biāo)記的親和素,,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的HVA呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度,。
1. 酶標(biāo)儀(建議參考儀器使用說明提前預(yù)熱)
2. 微量加液器及吸頭,,EP管
3. 蒸餾水或去離子水,全新濾紙
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