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96T人白細(xì)胞介素-1 ELISA 檢測試劑盒說明書
閱讀：121 發(fā)布時間：2012-10-12| 提 供 商 | 上海撫生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 36.5KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 121次 |
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人白細(xì)胞介素-1 ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本：血清或血漿
試驗原理：
IL-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測,。先將IL-1和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中IL-1的濃度呈比例關(guān)系。
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標(biāo)記的抗IL-1抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型
人白細(xì)胞介素-1 ELISA 檢測試劑盒自備材料
1． 蒸餾水,。
2． 加樣器：5ul,、10ul、50ul,、100ul,、200ul、500ul,、1000ul,。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。
2． 實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存,。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集,、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5,、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,，不能儲存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 pg/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。
400 pg/ml （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。
2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1． 使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
4． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7． 每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8． 取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
人白細(xì)胞介素-1 ELISA 檢測試劑盒建議使用的實驗方案
標(biāo)準(zhǔn)品濃度（pg/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果,。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的IL-1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線，樣品的IL-1含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。
3,、檢測值范圍：0-800pg/ml
4、敏感度： 1.0 pg/ml
兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽（PⅠCP）ELISA試劑盒 rabbit Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA試劑盒
兔子Ⅰ型膠原（Col Ⅰ）ELISA試劑盒 rabbit Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA試劑盒
兔子Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）ELISA試劑盒 rabbit Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA試劑盒
兔子Ⅲ型前膠原肽（PⅢNP）ELISA試劑盒 rabbit N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA試劑盒
兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢNT）ELISA試劑盒 rabbit procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT ELISA試劑盒
兔子凝血因子Ⅱ（FⅡ）ELISA試劑盒 Rabbit coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA試劑盒
兔子C反應(yīng)蛋白（CRP）ELISA試劑盒 rabbit C-Reactive Protein,CRP ELISA試劑盒
兔子內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3（eNOS-3）ELISA試劑盒 Rabbit Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISA試劑盒
兔子膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白（CETP）ELISA試劑盒 Rabbit cholest erolester transfer protein,CETP ELISA試劑盒
兔子可溶性粘附分子（Sam）ELISA試劑盒 Rabbit soluble adhesion molecules,Sam ELISA試劑盒
兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w（ANGA）ELISA試劑盒 Rabbit anti-neutrophil granules antibody,ANGA ELISA試劑盒
兔子孕激素/孕酮（PROG）ELISA試劑盒 Rabbit Progesterone,PROG ELISA試劑盒
兔子膠原酶II（Collagenase II）ELISA試劑盒 Rabbit Collagenase Type II ELISA試劑盒
兔子膠原酶I（Collagenase I）ELISA試劑盒 Rabbit Collagenase I ELISA試劑盒
兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3（TRAIL-R3）ELISA試劑盒 Rabbit tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA試劑盒
兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3（TRAIL-R3）ELISA試劑盒 Rabbit tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA試劑盒
兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α（MIP-1α/CCL3）ELISA試劑盒 Rabbit Macrophage Inflammatory Protein-1α,MIP-1α ELISA試劑盒
兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）ELISA試劑盒 Rabbit glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA試劑盒
瓜氨酸 cit
魚孕激素/孕酮 PROG ELISA試劑盒
鮭魚降鈣素（SCT）ELISA試劑盒 Salmon calcitonin,SCT ELISA試劑盒