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免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒說(shuō)明書
閱讀:192 發(fā)布時(shí)間:2015-1-19提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 46KB |
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免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒說(shuō)明書
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本:體液
免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒試驗(yàn)原理:
BFGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知BFGF濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將BFGF和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒洗滌后,,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,,然后加入底物A、B,,和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中BFGF的濃度呈比例關(guān)系,。
免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒自備材料
1.蒸餾水。
2.加樣器:5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200,、500ul、1000ul,。
3.振蕩器及磁力攪拌器等,。
安全性
1.避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2.實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)
1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子,。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8.加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
9.按照中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒樣品收集,、處理及保存方法
1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2,、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3,、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。
2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒操作步驟
1.使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時(shí)。
4.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
7.每孔加入底物A,、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9.在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果,。
免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。
免疫球蛋白G1(IgG1)ELISA試劑盒結(jié)果判斷與分析
1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),,相應(yīng)的BFGF標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,,樣品的BFGF含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。
3、檢測(cè)值范圍:0-800pg/ml
4,、敏感度: 1.0 pg/ml
ADMA 人不對(duì)稱二甲基精氨酸 規(guī)格: 48T/96T
CFH 人補(bǔ)體因子H 規(guī)格: 48T/96T
C5b 人補(bǔ)體片斷5b 規(guī)格: 48T/96T
C5b 人補(bǔ)體片斷5b 規(guī)格: 48T/96T
C 人補(bǔ)體片斷 規(guī)格: 48T/96T
C4b 人補(bǔ)體片斷4b 規(guī)格: 48T/96T
C4b 人補(bǔ)體片斷4b 規(guī)格: 48T/96T
C3b 人補(bǔ)體片斷3b 規(guī)格: 48T/96T
C3b 人補(bǔ)體片斷3b 規(guī)格: 48T/96T
C3a 人補(bǔ)體片斷3a 規(guī)格: 48T/96T
C3bR 人補(bǔ)體片段3b受體 規(guī)格: 48T/96T
CCP 人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
C4 人補(bǔ)體蛋白4 規(guī)格: 48T/96T
C3 人補(bǔ)體蛋白3 規(guī)格: 48T/96T
C7 人補(bǔ)體7 規(guī)格: 48T/96T
C3SP 人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物 規(guī)格: 48T/96T
C1INH 人補(bǔ)體1抑制物抗體 規(guī)格: 48T/96T
VN/CD51+CD61 人玻連蛋白/體外粘連蛋白 規(guī)格: 48T/96T