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技術(shù)文章

免疫技術(shù)用熒光染料

閱讀:186          發(fā)布時(shí)間:2016-8-5

    ELISA試劑盒在流式細(xì)胞計(jì)的應(yīng)用中,,熒光色素是關(guān)鍵試劑,,免疫熒光的檢測,對(duì)試劑的要求尤其具有特殊性,。
     對(duì)熒光染料的要求1,、染料必須在理想的激光光源的某一波長有強(qiáng)烈吸收;2,、由于免疫熒光測定,,信號(hào)的強(qiáng)度是主要限制因素,故要求染料應(yīng)有較高的量子效應(yīng)3,、激發(fā)光和發(fā)射光之間要有較大的波長區(qū)別,,以便使熒光能與激發(fā)光源所造成的背景區(qū)別開來4、便于同抗體和其他蛋白偶聯(lián),,又不影響其熒光及抗體的特異性,。
熒光染料  常見者見表,。其中FITC已為國內(nèi)免疫界通用,此外不做介紹,。當(dāng)前國內(nèi)常用的商品化的染料類是藻膽蛋白(Ohycobili protein)是來自光合青色細(xì)菌(photosyntheric  cyanobacteria)和紅色藻類(Red algae)的自然熒光色素。其基本類型為:藻紅蛋白(Phycoerythrin,,PE),、藻青蛋白(Phycocyanin)及別藻青蛋白(Allophycocyanin,APC),其分子結(jié)構(gòu)基本是幾個(gè)帶有開鏈四吡咯色基因的多肽混合物,,很適合標(biāo)記抗體,,它們有以下特點(diǎn):可以在廣泛的波長下有效地激發(fā);每個(gè)分子都帶有許多產(chǎn)生高激發(fā)系數(shù)的發(fā)光色基團(tuán),;激發(fā)光,、發(fā)射光易鑒別(Stokes位移大);易溶于水,,發(fā)出的熒光不受pH影響,,因而不易受生物因素影響而淬滅。這類熒光色素的代表是藻紅蛋白,。目前,,盡管應(yīng)用者較多,但其標(biāo)記困難及結(jié)合物易形成素脫落,,保存時(shí)間短等缺點(diǎn),,也影響其推廣,人們正在尋找新的熒光染料,。為了測定細(xì)胞表面的多種標(biāo)記,,還應(yīng)考慮免疫熒光染料反光源和這些顏料的相互配合的要求;1,、兩種以上抗體同兩種以上色素交聯(lián),,該色素可被單波長光激發(fā),并能通過特殊的發(fā)射光區(qū)別開,;或用不同激發(fā)波長來激發(fā),,發(fā)射光可通過光譜的差異、特殊發(fā)射光或發(fā)射時(shí)間不同來區(qū)別,。2,、結(jié)合抗體的色素不干擾抗體反應(yīng)的特異性,或同一實(shí)驗(yàn)中其他色素的特性,。3,、適用一步、二步,、三步染色法,,加適當(dāng)對(duì)照組能克服試劑間的干擾,。ELISA試劑盒
    為了測定細(xì)胞表面的多種標(biāo)記,還應(yīng)考慮免疫熒光染料反光源和這些顏料的相互配合的要求,;1,、兩種以上抗體同兩種以上色素交聯(lián),該色素可被單波長光激發(fā),,并能通過特殊的發(fā)射光區(qū)別開,;或用不同激發(fā)波長來激發(fā),發(fā)射光可通過光譜的差異,、特殊發(fā)射光或發(fā)射時(shí)間不同來區(qū)別,。2、結(jié)合抗體的色素不干擾抗體反應(yīng)的特異性,,或同一實(shí)驗(yàn)中其他色素的特性,。3、適用一步,、二步,、三步染色法,加適當(dāng)對(duì)照組能克服試劑間的干擾,。

MTCH1    細(xì)胞增殖誘導(dǎo)蛋白60(早老素相關(guān)蛋白)
MTCH2    線粒體載體同源蛋白2抗體
MTFR1    線粒體裂變調(diào)節(jié)蛋白1抗體
MTP18    線粒體蛋白18抗體
MICS1    生長激素誘導(dǎo)跨膜蛋白抗體(源性蛋白2)
MFF    線粒體裂變因子MFF抗體
Mouse serum albumin    小鼠血清白蛋白抗體

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