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流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展
閱讀：907 發(fā)布時(shí)間：2016-6-29ELISA試劑盒流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, 簡稱FCM）是對細(xì)胞貨細(xì)胞器快讀測量的高技術(shù),。依賴測量的參數(shù),，還可以用物理的方法將一個(gè)群體中的亞群分選出來,，這就是流式細(xì)胞分選術(shù),。上述的“流式”,，指的是在測量過程中細(xì)胞是流動(dòng)的，不是靜止的,，這是與在此前對細(xì)胞測量技術(shù)的zui大差異之處,。流式細(xì)胞書目前在國外的一些有關(guān)實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院已發(fā)展成常規(guī)技術(shù)，在我國經(jīng)過十年的推廣也逐漸普及,。經(jīng)過數(shù)十年的努力,，流式細(xì)胞術(shù)從一個(gè)只能計(jì)數(shù)，稍后可測粒子大小的一起,，發(fā)展到今天可快速測定同一個(gè)細(xì)胞的多種化學(xué)和物理的特性,，這中間凝集這許多人的心血，既有成功也是失敗,。
通過這些實(shí)驗(yàn),，人們發(fā)現(xiàn)，在流式細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞要流過的狹窄管道中存在的zui大問題是大細(xì)胞貨細(xì)胞團(tuán)阻塞通道,，為解決這個(gè)困境,，人們不禁想起1883年和Reynolds用來研究管子中層流時(shí)使用的鞘液原理。Guker等人在1947年就是用這個(gè)原理個(gè)光電技術(shù)結(jié)合起來對氣溶膠中的粒子進(jìn)行計(jì)數(shù),。隨后,。
他讓懸浮的細(xì)胞慢慢地注入快速流動(dòng)的液柱中，這個(gè)液柱外面被層流鞘液包圍著,，粒子在軸心流動(dòng),。這樣做有兩個(gè)好處：一是消除了大個(gè)顆粒阻塞現(xiàn)象；二是它可控制粒子進(jìn)入液柱的位置,，使之在軸心上,，這樣就建立了流體動(dòng)力聚焦的原理。今天,，幾乎所有的流式細(xì)胞術(shù)的液流原理都擦私用了上述技術(shù)。
1949年,，Wallance Coulter申請了一個(gè)名叫“流動(dòng)的懸浮粒子技術(shù)方法”的,，在的方法中，他使粒子通過一個(gè)小孔,。只要粒子與懸浮的介質(zhì)間在電導(dǎo)率上有差異,，小孔中粒子的存在與否即能引起可檢測出的電特性變化，此現(xiàn)象通常被稱為Coulter效應(yīng),，他在次基礎(chǔ)上了Coulter計(jì)數(shù),。
Kamentsky提出兩個(gè)新概念：意識(shí)用分光光度學(xué)定量測量細(xì)胞組分；另一個(gè)是細(xì)胞的不同組分可以被同時(shí)多參數(shù)測量,，用以給細(xì)胞分類,。zui初曾用核算的紫外吸收和可見光散射兩個(gè)參數(shù)同事測量未染色的細(xì)胞，測量的速度大約是每秒測50個(gè)細(xì)胞,。他同時(shí)也是*個(gè)用兩維直方圖顯示并分析多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)的人,。他也是*個(gè)用計(jì)算機(jī)接口到儀器上，記錄并分析多參數(shù)數(shù)據(jù)的人,。
ELISA試劑盒他們在測量粒子的熒光或磷光時(shí),，讓粒子平行于透鏡光軸的方向運(yùn)動(dòng),，并通過大數(shù)值孔徑物鏡的焦面，粒子通過焦面后再用一個(gè)沖洗液使之偏轉(zhuǎn),。該裝置使用了Kohler照明,，因而在粒子運(yùn)動(dòng)的出口處可得到均勻的照明，這就免去了聚焦的問題,。這樣一個(gè)設(shè)備可以用Kohler照明進(jìn)行熒光的激發(fā),，也可以手機(jī)發(fā)散的熒光，光源使用氙燈或高壓汞燈,。采用大的數(shù)值孔徑透鏡保證了激發(fā)光和收集發(fā)射光都有大的立體角,，而較大的立體角又可在測量非對稱細(xì)胞時(shí)細(xì)胞不同的取向不致使信號(hào)發(fā)生變化。
這種不依賴顯微鏡的設(shè)備采用了由Crosland-Taylor設(shè)計(jì)的層流流動(dòng)室并使用氬離子激光器為照明光源,。這種垂直相交的系統(tǒng)以后更進(jìn)一步發(fā)展,，除了可測熒光外還可測量散射光，后來還把Coullter計(jì)數(shù)器也安裝進(jìn)去,。他們*個(gè)用熒光Feulgen反應(yīng)對細(xì)胞DNA染色,，展示了DNA倍性和熒光間的線性關(guān)系，他們的DNA直方圖*個(gè)清楚的顯示出細(xì)胞周期的G1時(shí)相,、S時(shí)相,，G2和M時(shí)相。他們*個(gè)用同步培養(yǎng)的細(xì)胞論述了定量細(xì)胞動(dòng)力學(xué),，而Gohde和Dittrich則是*個(gè)用流式細(xì)胞術(shù)測量DNA以確定細(xì)胞周期變化來研究藥物影響細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)的人,。
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