化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展
閱讀：829 發(fā)布時(shí)間：2016-6-29ELISA試劑盒流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, 簡(jiǎn)稱FCM）是對(duì)細(xì)胞貨細(xì)胞器快讀測(cè)量的高技術(shù),。依賴測(cè)量的參數(shù),，還可以用物理的方法將一個(gè)群體中的亞群分選出來,，這就是流式細(xì)胞分選術(shù)。上述的“流式”,，指的是在測(cè)量過程中細(xì)胞是流動(dòng)的,，不是靜止的,，這是與在此前對(duì)細(xì)胞測(cè)量技術(shù)的zui大差異之處。流式細(xì)胞書目前在國(guó)外的一些有關(guān)實(shí)驗(yàn)室,、醫(yī)院已發(fā)展成常規(guī)技術(shù),，在我國(guó)經(jīng)過十年的推廣也逐漸普及。經(jīng)過數(shù)十年的努力,，流式細(xì)胞術(shù)從一個(gè)只能計(jì)數(shù),，稍后可測(cè)粒子大小的一起，發(fā)展到今天可快速測(cè)定同一個(gè)細(xì)胞的多種化學(xué)和物理的特性,，這中間凝集這許多人的心血,，既有成功也是失敗。
通過這些實(shí)驗(yàn),，人們發(fā)現(xiàn),，在流式細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞要流過的狹窄管道中存在的zui大問題是大細(xì)胞貨細(xì)胞團(tuán)阻塞通道，為解決這個(gè)困境,，人們不禁想起1883年和Reynolds用來研究管子中層流時(shí)使用的鞘液原理,。Guker等人在1947年就是用這個(gè)原理個(gè)光電技術(shù)結(jié)合起來對(duì)氣溶膠中的粒子進(jìn)行計(jì)數(shù)。隨后,。
他讓懸浮的細(xì)胞慢慢地注入快速流動(dòng)的液柱中,，這個(gè)液柱外面被層流鞘液包圍著，粒子在軸心流動(dòng),。這樣做有兩個(gè)好處：一是消除了大個(gè)顆粒阻塞現(xiàn)象,；二是它可控制粒子進(jìn)入液柱的位置，使之在軸心上,，這樣就建立了流體動(dòng)力聚焦的原理,。今天，幾乎所有的流式細(xì)胞術(shù)的液流原理都擦私用了上述技術(shù),。
1949年，Wallance Coulter申請(qǐng)了一個(gè)名叫“流動(dòng)的懸浮粒子技術(shù)方法”的,，在的方法中,，他使粒子通過一個(gè)小孔。只要粒子與懸浮的介質(zhì)間在電導(dǎo)率上有差異,，小孔中粒子的存在與否即能引起可檢測(cè)出的電特性變化,，此現(xiàn)象通常被稱為Coulter效應(yīng)，他在次基礎(chǔ)上了Coulter計(jì)數(shù),。
Kamentsky提出兩個(gè)新概念：意識(shí)用分光光度學(xué)定量測(cè)量細(xì)胞組分,；另一個(gè)是細(xì)胞的不同組分可以被同時(shí)多參數(shù)測(cè)量，用以給細(xì)胞分類,。zui初曾用核算的紫外吸收和可見光散射兩個(gè)參數(shù)同事測(cè)量未染色的細(xì)胞,，測(cè)量的速度大約是每秒測(cè)50個(gè)細(xì)胞,。他同時(shí)也是*個(gè)用兩維直方圖顯示并分析多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)的人。他也是*個(gè)用計(jì)算機(jī)接口到儀器上,，記錄并分析多參數(shù)數(shù)據(jù)的人,。
ELISA試劑盒他們?cè)跍y(cè)量粒子的熒光或磷光時(shí)，讓粒子平行于透鏡光軸的方向運(yùn)動(dòng),，并通過大數(shù)值孔徑物鏡的焦面,，粒子通過焦面后再用一個(gè)沖洗液使之偏轉(zhuǎn)。該裝置使用了Kohler照明,，因而在粒子運(yùn)動(dòng)的出口處可得到均勻的照明,，這就免去了聚焦的問題。這樣一個(gè)設(shè)備可以用Kohler照明進(jìn)行熒光的激發(fā),，也可以手機(jī)發(fā)散的熒光,，光源使用氙燈或高壓汞燈。采用大的數(shù)值孔徑透鏡保證了激發(fā)光和收集發(fā)射光都有大的立體角,，而較大的立體角又可在測(cè)量非對(duì)稱細(xì)胞時(shí)細(xì)胞不同的取向不致使信號(hào)發(fā)生變化,。
這種不依賴顯微鏡的設(shè)備采用了由Crosland-Taylor設(shè)計(jì)的層流流動(dòng)室并使用氬離子激光器為照明光源。這種垂直相交的系統(tǒng)以后更進(jìn)一步發(fā)展,，除了可測(cè)熒光外還可測(cè)量散射光,，后來還把Coullter計(jì)數(shù)器也安裝進(jìn)去。他們*個(gè)用熒光Feulgen反應(yīng)對(duì)細(xì)胞DNA染色,，展示了DNA倍性和熒光間的線性關(guān)系,，他們的DNA直方圖*個(gè)清楚的顯示出細(xì)胞周期的G1時(shí)相、S時(shí)相,，G2和M時(shí)相,。他們*個(gè)用同步培養(yǎng)的細(xì)胞論述了定量細(xì)胞動(dòng)力學(xué)，而Gohde和Dittrich則是*個(gè)用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量DNA以確定細(xì)胞周期變化來研究藥物影響細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)的人,。
ELISA試劑盒