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技術(shù)文章

細(xì)胞表觀基因原理

閱讀:172          發(fā)布時(shí)間:2016-6-8

ELISA試劑盒研究方向則主要圍繞哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育,,研究胚胎干細(xì)胞和上胚層干細(xì)胞的自我更新能力和多能性調(diào)控的分子機(jī)理,,特別是表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)理,以及相關(guān)的原始細(xì)胞發(fā)育過程中的表觀遺傳學(xué)重編程機(jī)理,。

相比于ChIP-on-Chip, ChIP-Seq是對(duì)目標(biāo)DNA片段進(jìn)行深度測(cè)序,,以較高的分辨率生成高度全面的數(shù)據(jù)的一種技術(shù)。其具有較少的人為假象(artifact),,具有更大的覆蓋度和更廣的動(dòng)態(tài)范圍,。盡管,近期開發(fā)出一些方法可利用少至1萬或甚至只5千個(gè)細(xì)胞來完成ChIP-Seq,。所有這些方法都依賴于數(shù)十微升樣本中ChIP反應(yīng),,以及在制備測(cè)序文庫之前通過線性擴(kuò)增(體外轉(zhuǎn)錄)或是指數(shù)擴(kuò)增(PCR)預(yù)擴(kuò)增ChIP產(chǎn)物。體外轉(zhuǎn)錄和PCR兩種方法有可能引入顯著的偏差,。

在這里北京大學(xué)的研究人員提出了一種新方法,,利用一種微流體設(shè)備加速了ChIP過程。無需預(yù)擴(kuò)增,,這一技術(shù)可獲得了來自僅1000個(gè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的高質(zhì)量ChIP-Seq數(shù)據(jù),。整個(gè)ChIP過程大大縮短至8小時(shí)。
表觀遺傳調(diào)控對(duì)細(xì)胞身份的建立和維持起至關(guān)重要的作用,。染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)是調(diào)查復(fù)雜的DNA與染色質(zhì)互作的zui重要方法之一,。將ChIP與一些分析技術(shù)結(jié)合,諸如ChIP-on-chip芯片技術(shù)或ChIP-Seq高通量測(cè)序技術(shù)是在細(xì)胞中研究表觀遺傳調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的*的工具,。然而,,由于抗體pull-down的低產(chǎn)出,DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物碎裂和裂解過程中對(duì)DNA的損傷,以及復(fù)雜的下游分析,,ChIP過程只能生成有限數(shù)量的DNA,。這種傳統(tǒng)的方法需要消耗相當(dāng)大量的樣本,通常是10的6次方到7次方個(gè)細(xì)胞,,才能克服這一低產(chǎn)量問題,,獲得可靠的結(jié)果。這種局限性也限制了ChIP應(yīng)用于珍貴的原代組織,,如早期胚胎細(xì)胞或的腫瘤干細(xì)胞等,。
通過這種方法,研究人員*次利用在胚胎發(fā)生第6.5天(E6.5)的1000個(gè)小鼠上胚層細(xì)胞,,開展了快速,、半自動(dòng)、高度敏感的ChIP分析,,調(diào)查了組蛋白修飾H3K4me3的全基因組景觀,,相比于小鼠胚胎干細(xì)胞(mESCs),發(fā)現(xiàn)植入后上胚層的H3K4me3景觀與小鼠上胚層干細(xì)胞(mEpiSCs)更為相似,。
新研究為我們提供了一個(gè)只需非常有限的材料對(duì)早期胚胎或其他情況下的表觀基因組景觀進(jìn)行全面分析的一種新方法,。

Alpha-ENaC    鈉通道蛋白α ENaC
E2F8    轉(zhuǎn)錄因子E2F8抗體
EMAP2    內(nèi)皮單核細(xì)胞激活肽2抗體
Ecm2    細(xì)胞外基質(zhì)蛋白2抗體
EMP3    上皮細(xì)胞膜蛋白3抗體
EVC2    膜蛋白EVC2抗體
EPDR1    哺乳動(dòng)物室管膜相關(guān)蛋白1抗體
ESAM    內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子抗體
Epigen    上皮細(xì)胞有絲分裂蛋白抗體
Emerin    Emerin蛋白抗體
ERK5    細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5抗體
ENPP5    磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員5抗體
EGR2    早期生長(zhǎng)反應(yīng)蛋白2抗體

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